Размер осп плиты: ОСП плиты (OSB-3): размеры и цены за лист

OSB-3 (ОСП плита) 12мм 1220х2440мм | Цена за лист — от 937,00 рублей

Ориентированно-стружечная плита OSB-3 толщиной 12 мм, стандартный формат — 1220х2440 мм. Плиты выпускает российский производитель Талион (Торжок).

Это одна из наиболее популярных толщин ОСП-3. Данная толщина плиты уже имеет достаточную прочность и жесткость, может так же применяться для устройства полов и несущих элементов конструкций с небольшой нагрузкой.

Соответствует требованиям стандартов: ТУ 5334-011-58242280-2013, EN 300, ГОСТ 10632-2007 п.п. 5.1, 5.2

Допуски и физико-механические свойства плиты ОСП 12мм

Параметр	Значение
Отклонение по длине и ширине плиты	± 3 мм
Отклонение толщины (для листа и в пределах партии)	± 0,8 мм
Отклонение от прямолинейности кромок на 1,0 м длины	1,5 мм
Отклонение от перпендикулярности кромок плиты на 1,0 м длины кромки	2,0 мм
Предел прочности при изгибе по главной оси плиты, не менее	20 МПа
Предел прочности при изгибе по второстепенной оси плиты, не менее	10 МПа
Модуль упругости при изгибе по главной оси плиты, не менее	3500 МПа
Модуль упругости при изгибе по второстепенной оси плиты, не менее	1400 МПа
Предел прочности при растяжении перпендикулярно к главной оси плиты, не менее	0,32 МПа
Отклонение плотности в пределах плиты	± 15 %
Абсолютная влажность плиты	2-12 %
Разбухание по толщине за 24 ч	20% ± 5%
Класс эмиссии формальдегида	Е1

Отклонения геометрии актуальны при относительной влажности воздуха 65% и температуре 20°С

Транспортирование и хранение плит

Транспортная маркировка — по ГОСТ 14192-96. Условия транспортировки и хранения должны исключать механические повреждения и воздействие атмосферных осадков. Должна обеспечиваться сохранность формы плит.

Рекомендуется хранить плиты в закрытых, сухих, проветриваемых помещениях, при температуре не ниже 5°С с влажностью не более 65%.

Расположение листов — горизонтальное, в штабелях высотой до 4,5 м, состоящих из стоп или пакетов.

ОСП (OSB) плита: размер, цены, применение

Листовые строительные материалы используют в каркасном домостроении, при сухом выравнивании плоскостей. Один из таких материалов — плита ОСП (ОСБ, OSB). Она потеснила фанеру, ДСП, ГКЛ. А все потому, что при хороших технических характеристиках, имеет невысокую цену. 

Содержание статьи

Что такое ОСП плита и ОСБ

Один из листовых строительных материалов — ОСП (называют еще ОСБ). Название — аббревиатура от полного наименования материала — «ориентировано-стружечная плита». То есть правильно этот материал называть ОСП. Второе название — ОСБ — произошло от транслитерации английского варианта названия  — OSB (oriented strand board). Английские буквы просто заменили на аналогичные в кириллице. 

Вот такой вид имеет ОСП плита

ОСП — это многослойный материал (3 и более слоев). Каждый слой состоит из древесины, размолотой в щепу, перемешанный со смолами. Щепа используется длинная и тонкая (толщиной в несколько миллиметров, длиной до 7 см). Щепа в слоях располагается в разные стороны: наружные слои имеют продольную ориентацию, внутренние — поперечную. За счет этого достигается высокая упругость и стабильность размеров. В качестве связующего используются различные смолы. Они придают материалу водостойкость, но содержат формальдегид. Именно содержание этого вещества останавливает многих от использования ОСП. Но, если материал произведен согласно ГОСТу, эмиссия формальдегида не превышает показатели древесины. Вот только проверить это можно только в лабораторных условиях. Так что рядовому покупателю остается только надеяться на проверяющие органы.

Или выбрать другой материал.

Виды ОСП

В зависимости от потребительских свойств ориентированно-стружечные плиты выпускают в нескольких видах:

Если вам необходимы влагостойкие ОСП, внимательно отнеситесь к выбору производителя. Будьте готовы к тому, что ОСП 3 дороже невлагостойких марок. Еще больше денег придется отдать за ОСП 4. Искать дешевый материал не советуем. Слишком многие жалуются что купленные OSB 3 от влажности разбухло на 3-8 мм, в некоторых случаях даже поцвело или поросло грибками. Все это — из-за попыток снизить себестоимость. Для этого используют меньше дезинфицирующих веществ, более дешевое связующее. Китайские производители вместо щепы сосны кладут лиственную, которая легко поражается грибками и болезнями.

Свойства и технические характеристики

Плиты ОСП конкурируют с другими листовыми материалами как в области строительства (для обшивки каркасов, создания опалубки), так и в области отделки (выравнивание стен, полов, потолков). Этому способствуют свойства ОСП:

Еще раз обращаем внимание, что влагостойкость и стойкость к деформациям свойственна ОСП, которые были сделаны с соблюдением технологии. К сожалению, материал российского производства не отличается высоким качеством. Используются менее мощные прессы, пытаются экономить на связующем, не наносят разметку. В результате есть много примеров негативного опыта: плиты от влаги разбухают, их коробит, клей вымывается… Выход — искать плиты импортного (Европа или США) производства. В связи с ростом доллара они сейчас имеют немалые цены, их очень мало на рынке, но, при желании, можно найти или заказать с доставкой.

Сравнение характеристик листовых строительных материалов

Ситуация усугубляется тем, что по внешнему виду отличить влагостойкий ОСП3 от невлагостойкого ОСП2 или 1 невозможно. Стоят последние намного меньше. Недобросовестные продавцы продают более дешевые под видом влагостойких. Вот и получаются неприятности. Как выход из положения можно поступить так: купить один лист ОСП 3, проверить его поведение при высокой влажности. Если видимых изменений нет, купить партию.

Область применения

Свойства ОСП позволяют использовать этот материал как строительный или отделочный. Вот при каких работах он может использоваться:

• Обшивка каркасов и стен изнутри и снаружи.
• Выравнивание пола, потолка.
• Настил чернового или чистового пола по лагам.
• Съемная опалубка при работе с бетоном.
• Сплошная обрешетка под битумную черепицу, металочерепицу, шифер, мягкие кровельные материалы.
• Производство СИП-панелей и термопанелей.

Среди застройщиков постоянно идут споры насчет того, насколько безопасна ОСП плита. При ее производстве используются смолы, которые выделяют формальдегид. Производители заявляют о том, что выделение этого вещества не превышает 1%. Материалы с такой эмиссией формальдегида читаются абсолютно безопасными. Примерно столько же этого вещества выделяет древесина. Потому такие материалы разрешены для постройки детской мебели. К тому же появились плиты OSB с эмиссией 0,5%. Отличить их можно по двум критериям: в наименовании стоит приставка Bio или Green и стоят они дороже.

Плита ОСП имеет широкую область применения

Обращаем внимание, что уровень эмиссии формальдегида должен контролироваться. Каждую партию материала должны проверять, указывать фактические параметры в сопроводительных документах. Несмотря на все доводы, не все считают это материал безопасным, предпочитая использовать натуральный материал — доски. Они, без сомнения, экологичный материал, но работать с досками дольше, стоят они дороже. В общем, каждый решает для себя — использовать плиты ОСП или нет.

Размеры ориентированно-стружечных плит

Так как назначение ОСП плита имеет различное, удобны могут быть разные размеры. Ситуация с размерами плит OSB непростая. В продаже есть постоянно 1220*2440 мм и 1250*2500 мм. Есть еще форматы 1250*2800 мм, 1250*3000 мм, 1200*6000 мм, но они встречаются на нашем рынке крайне редко, хотя во многих случаях их использовать намного удобнее. Подобрав нужный размер избавляешься от необходимости «доращивать» недостающие сантиметры или отпиливать лишние. Но их не так много на рынке, так как это — плиты импортного производства, а с импортом сейчас сложно…

Плита ОСП может быть разной толщины

Плита ОСП может быть и разной толщины — 9 мм, 12 мм, 15 мм, 18 мм, 22 мм, 25 мм. Для каждого типа использования подходит своя толщина:

• Обшивка стен, потолка — от 9 мм.
• Сплошная обрешетка под кровельные материалы — от 12 мм.
• На пол пойдет плита ОСП от 15 мм толщины.

Еще одно из применений плит ОСБ — съемная опалубка для бетонных работ

ОСП плита — удобный строительный материал. Его можно пилить обычной пилой по дереву, использовать болгарку с режущим диском, электролобзик. Материал хорошо сверлится, без предварительного засверливания можно использовать винтовые гвозди. Но тогда их шляпки торчат, что не всегда удобно.

Перед отделкой плита ОСП покрывается грунтовкой. Ее подбирают в зависимости от отделочных материалов — для выравнивания впитывающей способности и улучшения сцепления с другими материалами.

ОСБ плиты: размеры, виды, характеристики

Плиты ОСБ становятся с каждым днём всё более популярными. Что же такое ОСБ? Это ориентированно-стружечные плиты, которые делают с помощью стружки из дерева и опилок. Плиты очень прочные, гибкие, имеют отличные технологические характеристики. Их применяют в каркасных строительных работах для того, чтобы обшить стены, сделать кровлю или перегородки.

Выглядит данная плита как прессованное полотнище, которое создано из щепочек, стружек и различных опилок. Внимательно рассмотрев данное полотно, вы увидите, что оно включает в себе далеко не один слой. Слои, которые находятся снаружи, располагаются вдоль, а слои, которые находятся внутри – сделаны в другом направлении. Все слои отлично между собой проклеены с помощью различных смол, воска, пропитки, поэтому изделие само по себе очень прочное.

Мы рассмотрим, какие бывают плиты ОСБ, каким образом их применяют в строительстве, увидим все их достоинства, перечислим самые популярные виды плит.

Виды ОСБ плит и сферы их применения

Сегодня специалисты делают разновидности ОСБ в количестве четырёх видов. Отличие их в том, что они имеют разные характеристики, применяются в различных отраслях.

1. Плита ОСБ 1 – это плита из древесно-стружечного материала, которая имеет невысокую плотность. Такая плитка не любит влажности, поэтому с помощью неё, в основном, делают предметы мебели.
2. Плита ОСБ 2 – плотнее и прочнее предыдущей, однако тоже боится воды и влаги. То, что эти плиты по своей структуре очень плотные, делает возможным использование их во внутреннем обшивании объектов, которые являются несущими, при этом влажность должна быть невысокой.
3. Плита ОСБ 3 – является самой востребованной. Она очень прочная и устойчива к влажности. Однако стоит учесть, что под влажностью здесь подразумеваются лишь намокания на очень короткое время. Чтобы обделывать ней объект снаружи, нужно будет ещё вдобавок защитить этот лист дополнительными материалами, то есть покрасить или пропитать.
4. Плита ОСБ 4 – особо прочная, суперустойчива к влаге. Может долгое время находится во влажной среде, и дополнительно защищать её не требуется. Но такие плиты стоят довольно дорого, поэтому применяют её не так часто, как ОСБ 3.

Так же листы плит проходят классификацию относительно своей толщины. Тоненькие плиты используются для обшивания предметов, которые не нагружают плиту. Например, стенки, каркас для мягкого покрытия, обшивка пола из дерева.

Толстую плиту используют для объектов с очень высокой нагрузкой на лист. Из них настилают пол, делаются конструкции, где по плану будут стоять тяжёлые материалы.

Характеристики ОСБ плит

ОСБ плиты начисляют в себе множество положительных характеристик, в связи с которыми они так часто применяются для строительных работ.

Характеристики ОСБ плит:

1. Очень прочные. Чем толще плита, тем больше нагрузки она выносит. Это может быть даже сто килограммов на один кв.м.
2. Гибкие и лёгкие. Эта характеристика разрешает применение плит для обшивания неровных поверхностей с высоким закруглением.
3. Однородные. Такие листы целостные, даже во время нагрузки. Не склонны к расслоению, в отличие от обыкновенной фанеры.
4. Качественные, как и натуральное дерево. Причём здесь нет минусов неровной формы, дефектности во время применения.
5. Легкие при обработке. Очень легко проходит распиливание, прикрепление, соединение таких материалов.
6. Имеют высокую теплоизоляцию и звукоизоляцию, сравнительно с прочими средствами.
7. Стойкие к воздействию химических материалов и повреждениям.
8. Антисептичны. В этих листах есть добавления, которые не дают размножаться грибковым и плесневым бактериям.
9. Неизменны в форме даже при долгом применении и после него.

Единственным минусом ОСБ является то, что в их состав часто входит клей с формальдегидом, а данное вещество вредно для здоровья. Но его используют не все производители.

Важно! Будьте внимательны при выборе плит, обращая внимание на клеевую основу, она должна быть безопасной!

Таблица физико-механических характеристик ОСБ плит

Показатели	Стан- дарт	Aggloply OSB 2	Aggloply OSB 3	OSB 2			OSB 3
Толщина, мм		10-18	10-18	6-10	10-18	18-25	6-10
Допуск по толщине, мм:    – плита нешлифованная    – плита шлифованная	EN 324-1	0,3 0,3	0,3 0,3	±0,8 ±0,3			±0,8 ±0,3
Допуск по длине, мм	EN 324-1	3	3	3			3
Допуск по ширине, мм	EN 324-1	3	3	3			3
Прямоугольность, мм	EN 324-2	1,5	1,5	1,5			1,5
Прямолинейность, мм/1м	EN 324-1	2	2	2			2
Модуль упругости, Н/мм²:    – продольная ось    – поперечная ось	EN 310	>6000 >2500	>6000 >2500	3500 1400			3500 1400
Прочность на изгиб, Н/мм²:    – продольная ось    – поперечная ось	EN 310	>35 >17	>35 >17	22 11	20 10	18 9	22 11
Поперечное растяжение, Н/мм²	EN 310	>0,75	>0,75	0,34	0,32	0,3	0,34
Формальдегиды, мг/100г	EN 120	<6,5	<6,5	<8			<8
Разбухание за 24 ч при полном погружении в воду, %	EN 317	12	6	20			15

Размеры ОСБ плит

Данные листы обычно имеют толщину примерно 8-25 миллиметров. Таким образом, они распределяются на три подгруппы:

• тонкие;
• средние;
• толстые.

Тонкая плита имеет толщину 8, 9 и 10 миллиметров. Средняя плита – 12 и 15 миллиметров, а толстая – 18, 22 и 25 миллиметров. Чем толще лист, тем больше весит плита. Плита толщиной 8 миллиметров будет весить 16,6 килограмм, 9 миллиметров – 18,4 килограмм, 10 миллиметров – 20,6 килограмм и так далее.

Больше всего пользуются популярностью листы с размерами 2440 на 1220 миллиметров. Их часто используют в строительных работах. По европейским стандартам популярным считается лист 2500 на 1250 миллиметров. Размер 2440 на 590 миллиметров встречается довольно редко и используется, в основном, для накрытия пола.

Таблица размеров ОСБ плит

Показатели	Плиты с ровными краями								Плиты со шпунтом
Размеры (дхш), мм	2440х1220, 2500х1250								2440х1220, 2440х590, 2450х590, 2500х1250
Толщина, мм	9	10	11	12	15	16	18	22	15	16	18	22
Количество листов в пакете, шт.	100	80	75	70	55	50	45	35	55	50	45	35

Покраска ОСБ плит

Данные изделия отлично переносят всевозможные виды отделочных работ. Эти плиты можно смело покрывать краской, наносить на них лак, штукатурить, делать обшивку с помощью кирпичной кладки и многое другое.

Красить ОСБ плиты лучше всего масляной краской, но можно также использовать алкидные эмали, водоэмульсионку, всевозможные пропитки. Краски нужно осторожно брать с помощью кисточки и наносить на плиту. Также можно воспользоваться специальными валиками или пульверизаторами.

На изделия отлично наносятся клеевые массы и лакокрасочные растворы. Это даёт широкие возможности изменять плиты во внешнем виде и защитить их от воздействия влаги. По завершении работы над покраской плит можно покрыть изделие лаком, однако только при проведении внутренних работ, в случае наружных работ используют более серьезные методы.

Прежде, чем перейти к окраске плиты, поверхность нужно подготовить. Сначала нужно выполнить шлифовку с помощью наждачной бумаги. Это делается для того, чтобы грунтовка и краска не попали внутрь плиты. Затем рабочую зону в местах крепления нужно выровнять с помощью шпаклёвки. Высохшую шпаклёвку стоит зачистить шкуркой. После этого поверхность равномерно грунтуется акриловым или акрилово-полиуретановым водным лаком для дерева пропорцией 1:10. Можно для этого приобрести специальную грунтовку. Дальше плита окрашивается и сушится. При этом избегайте сквозняков и перепадов температур.

Ориентированно-стружечные плиты являются поистине качественным материалом современного строительства. Сейчас эти средства популярны в строительных работах, очень часто используются. На свою цену изделия действительно очень качественные и полностью её оправдывают. Среди тех людей, которые использовали данные плиты, практически не найдётся ни одного, который бы негативно о них отозвался. Листы ОСБ имеют огромное количество положительных характеристик, что делает их применение достаточно лёгким.

Для того, чтобы качественно облицевать объект с помощью этих плит, нужно с грамотностью подойти к их выбору, полностью изучить их разновидности и характеристики, чтобы потом не жалеть о покупке.

Эти листы считаются отличным решением для всех специалистов. Они позволяют создавать целые дома, используя технологию каркасов, идеальны для отделки стен, крыш, полов. Всё это делается с этими материалами в кратчайшее время. Жильё, выполненное с применением ОСБ плит, будет служить долговечно и обеспечит жильцам комфорт и уют.

технические характеристики, размеры и цены

ОСП или ориентированно-стружечная плита – универсальный листовой материал, который с недавних пор все шире применяется в строительстве и ремонте. Его появление связывают с бумом на канадские домики в Европе, где и придумали эту легкую и относительно доступную по цене обшивку. Но кто знает, стали бы так популярны быстровозводимые каркасники, если бы не появились многослойные СИП-панели из OSB.

Оглавление:

1. Что представляют собой ОСП?
2. Разновидности панелей
3. Область применения плит
4. Вредны ли ориентированно-стружечные плиты?
5. Цена плит разных размеров

Состав и размеры

В отличие от наших ДСП, эти плиты изготавливаются из очень крупной древесной щепы размером до 14-18 см в длину. Стружка не спрессовывается в хаотичном порядке, а послойно укладывается в определенном направлении: продольно в верхней и нижней частях листа и поперек – в середине. В результате получается куда более легкий материал, но при этом достаточно прочный на сжатие. Хотя на изгиб они все равно работают слабо.

А вот для склейки плиты OSB используются те же формальдегидные смолы, что и для изготовления фанерных листов. В плане экологичности решение оказалось не самым лучшим, зато производителям удалось заметно увеличить влагостойкость композитных панелей. Да и разнонаправленность стружки в слоях снизила влажностные деформации плит до минимума.

Основной размерный ряд OSB невелик и разнообразием не радует. Самыми распространенными оказались варианты 1,25х2,5 и 1,22х2,44 м – они встречаются в ассортименте всех производителей, выпускающих ОСП с прямыми и шпунтованными кромками (последние облегчают сборку обшивки и делают ее стыки плотнее). Но можно купить листы и с другими габаритами:

Тип кромки	Толщина, мм	Размеры плиты, мм
Прямая	6 – 22	1250х2800	2000х3125
Профилированная		590х2440	590х2450

Виды и характеристики

В отличие от других древесно-стружечных материалов, OSB плита плотностью 640-700 кг/м³ неплохо удерживает в своем теле металлический крепеж (шурупы, гвозди). По крайней мере, монтажные отверстия в ней не разрыхляются после одного вкрученного-выкрученного самореза. При этом обработка листов ручным инструментом остается довольно простой, что стоит записать в плюсы. Кроме того, ОСП неплохо удерживают на поверхности лакокрасочные, выравнивающие и клеевые составы, что упрощает и делает разнообразнее их отделку.

По показателям прочности и влагостойкости плиты принято делить на четыре основных класса. Они же и определяют сферу применения панелей:

• OSB-1 – самые дешевые по цене листы, пригодные только для использования в сухих помещениях и работы без серьезных нагрузок. На изгиб выдерживают 1200 и 2500 Н/мм² (в направлении поперечной и продольной оси соответственно), при высокой влажности разбухают на 25%.
• OSB-2 – могут применяться в строительстве несущих конструкций, но все с тем же условием – невысокой влажности. Сопротивление на изгиб у них чуть повыше (1400 и 3500 Н/мм²), деформация при намокании достигает 20%.
• OSB-3 – плита повышенной влагостойкости. Это уже улучшенный вариант, отлично воспринимающий механические нагрузки на уровне второго класса. От прямого контакта с влагой разбухает не более чем на 15%. «Тройка» на сегодня является самым распространенным и востребованным в строительстве материалом, поскольку не имеет серьезных ограничений по применению.
• OSB-4 – очень прочные плиты, выдерживающие интенсивную эксплуатацию, изгибающие нагрузки до 1800 и 4800 Н/мм² и работу во влажной среде. Степень деформации таких панелей не превышает 12%, но и стоимость их высока.

Также на рынке встречается особо влагостойкая плита с защитным ламинирующим слоем – такой материал используют и для декоративной обшивки, и для сборки многоразовой съемной опалубки в бетонных работах. Листы изготавливают на базе ОСП-3 толщиной не менее 10-12 мм, облицовывая их с двух сторон. Еще один вариант – шлифованные и лакированные, которые больше подходят для внутренней отделки (здесь уже обработке подвергается только «лицевая» поверхность).

Несмотря на вполне достойные технические характеристики плит, в плане пожарной безопасности они оставляют желать лучшего: группа горючести ОСП соответствует Г4. Поэтому для жилищного строительства производители выпускают панели с огнезащитными пропитками, снижающими этот показатель до более приемлемых Г1-Г2.

Применение

Изначально ориентированно-стружечная плита использовалась в каркасном строительстве как составная часть СИП-панелей – трехслойных конструкций, где между двумя листами ОСП вклеивался толстый слой утеплителя. Однако материал оказался настолько хорош, что сфера заметно расширилась. С его помощью сегодня выполняют самые разные работы:

• Укладку чернового пола и обшивку потолков – здесь эстетичные и более дешевые ОСП уже практически вытеснили фанеру. При этом на них можно не только стелить линолеум или ковролин, но и клеить тяжелую керамическую плитку, укладывать ламинат и паркет.
• Монтаж сплошного основания под мягкие кровельные материалы (гибкую черепицу, рубероид) – немаленькие размеры панелей позволяют заметно ускорить работы и не дают особой нагрузки на стропильную систему.
• «Сухое» выравнивание стен для дальнейшей отделки помещений. Впрочем, некоторые сегодня и вовсе ограничиваются лакированными плитами, не окрашивая и не оклеивая их обоями. Внешний вид ОСП вполне привлекателен, а использование шпунтованных вариантов позволяет создать сплошную и ровную фальшстену – теплую и приятную на ощупь.
• Изготовление щитов опалубки – как мы уже отмечали, для такой работы годятся только ламинированные ОСП, но и они выходят дешевле фанерных листов.
• Монтаж стеллажей и антресолей, сборка корпусной мебели – такое применение производители нашли самым слабым и нестойким к повышенной влажности панелям первого и второго класса прочности.

О вреде ОСП

Здесь у производителей и экспертов до сих пор нет точек соприкосновения, поэтому споры все еще продолжаются. Если смотреть на вопрос объективно, то в состав ОСП действительно входит формальдегид, который несет вред для здоровья, если находится в химически несвязанном виде. Однако, насколько он опасен для человека, зависит только от его концентрации в воздухе. Поэтому панели ОСП принято делить по классам эмиссии:

• Е0 (3-5 мг/100 г) – считается абсолютно безопасным и применяется без каких-либо ограничений в строительстве и изготовлении мебели;
• Е1 (до 10 мг/100 г) – допускается к использованию в жилых помещениях;
• Е2 (10-30 мг/100 г) – применение таких материалов категорически запрещено внутри дома, а вот для наружной обшивки стен и кровли они вполне годятся.

Если же на штампе плиты или в сопроводительных документах класс эмиссии не указан, безопасный в плане токсичности ОСП можно определить с помощью приведенных ПДК: по фенолу и формальдегиду допустимая концентрация не должна превышать 0,003 мг/м³. Когда возникают сомнения по поводу соответствия выбранного материала требуемым характеристикам, лучше оставить его проветриться на воздухе под защитой навеса. Через пару-тройку месяцев количество вредных летучих веществ в любом случае кратно уменьшится и придет в норму.

Рекомендации по выбору

Увы, наличие сертификата соответствия у продавца еще не означает, что вам досталась ОСП плита надлежащего качества. Низкосортные листы обычно выдает резкий химический запах. Чтобы не рисковать, лучше сразу обратить внимание на продукцию солидных производителей вроде Калевала, Кроношпан или Egger, невзирая на стоимость. Далее вам предстоит определиться с классом прочности, хотя для большинства строительных и отделочных работ будет достаточно ОСП-3. Перед покупкой не забудьте проверить целостность упаковки – это убережет вас от приобретения деформировавшихся вследствие неправильного хранения материалов.

Размеры листа, цена и толщина плит разных марок (OSB-3):

Производитель	ВхШ, мм	Толщина, мм	Стоимость листа, рубли
Taleon	2500х1250	6	400
Norbord	2440х1220	8	450
Kalevala	2500х1250	9	580
Glunz	2500х1250	9	1040
Kronospan	2440х1220	12	585
Bolderaja	2500х1250	18	1020
Egger	2600х2070	26	2350

ОСБ 10 мм | Цена

В линейке ориентированных стружечных плит типоразмер осб-3 10 мм является одним из наиболее универсальных, так как обладает приемлемой толщиной и достаточной прочностью для решения множества строительных задач. Этот материал, состоящий из трех слоев проклеенной специальными смолами и спрессованной под высоким давлением деревянной щепы, по прочности значительно превосходит дерево. В отличие от древесно-стружечных материалов прошлого, эти плиты не содержат вредных для здоровья людей смол, не боятся влаги, и обладают повышенной стойкостью к эксплуатационным нагрузкам.
Область практического применения ОСБ 10 мм

В соответствии с рекомендациями производителей материала и практическим опытом, основной областью использования плит osb-3 10 мм является обшивка перегородок и внутренних поверхностей несущих стен в домах, возводимых по технологии каркасного строительства. Не менее часто данный материал применяют при изготовлении полов – в качестве утепляющей и выравнивающей основы между обработанной консервирующим грунтом бетонной стяжкой, и ламинатом, ковролином или линолеумом.

Еще одной строительной задачей, для реализации которой целесообразно купить плиты именно такой толщины, является подбивка потолков в дачных домах, подсобных помещениях коттеджей и временных постройках. Кроме того, осб 10 мм допускается использовать в качестве подложки под мягкую черепицу на кровлях с большим углом уклона и расстоянием между досками обрешетки 0,25 – 0,35 метра. Выгодная цена за лист и достаточная прочность оправдывают использование плит данной толщины во всех перечисленных случаях – как технически, так и экономически.

Преимущества применения плит 10 мм

Особенности технологии производства, состав связующих смол, значительная длина исходной стружки и поперечная ориентация слоев прессованного древесного материала, определили уникальные потребительские свойства плит осб и широкий диапазон их использования в строительном деле. Производители утверждают, что при правильном применении эта влагостойкая плита не имеет ограничений по сроку службы. Доступная цена, которая у большинства производителей за лист 10 мм примерно одинакова, также является важным фактором популярности данного материала и причиной растущих объемов его продаж.

Важнейшим преимуществом листов осб 10 мм является их универсальность. Требования строительных норм и рекомендации производителей носят несколько завышенный характер. Плиты такой толщины в частном и дачном строительстве используются практически для всех видов работ, кроме монтажа нагруженного пола на лагах. Сравнивая стоимость этого материала с другими толщинами, потребитель выбирает разумную середину. Оптимальный вес и простота распиловки определяют удобство использования, а высокая влагостойкость и прочность гарантируют практически неограниченный срок службы изготовленных конструкций.

Технические характеристики листов ОСБ-3 толщиной 10 мм

Благодаря оптимальному составу связующих смол, высоким температурам и предельным значениям давления, которые применяются при формировании трехслойных ориентированных стружечных материалов, осб плита 10 мм имеет высокие показатели прочности на изгиб (20 – 22 Н/мм2 по главной оси), на растяжение (0,32 – 0,34 Н/мм2) и общий модуль упругости в пределах 3500 Н/мм2. Средний удельный вес стружечных плит большинства производителей практически не отличается от плотности древесины сосны и ели.

Потенциальному покупателю следует знать, что листы осб 10 мм от различных производителей могут несколько отличаться по габаритам. Существует два стандарта линейки форматов – европейский и американский (канадский). У большинства европейских производителей листы имеют размеры 1250х2500 мм, заокеанский материал несколько меньше – 1220х2440 мм. Как следствие, указанный в спецификациях производителей вес плит одинаковой толщины также может отличаться.

Выгода приобретения плит OSB 10 мм в магазине «ФЕРОТЕКС»

Закупая плитные материалы у непосредственных производителей и их уполномоченных представителей крупным оптом, мы можем предложить своим заказчикам уникально низкие цены на весь сортамент плит осб 10 мм. Эти и другие строительные материалы у нас выгодно купить как в больших объемах для нужд каркасного строительства, так и в небольших количествах для ограниченного использования при ремонте квартир, дач, и возведения небольших садовых и хозяйственных построек. Понравился материал статьи? Расскажите о нём:

OSB плита. Размеры, применение на пол и стены.

Чем больше видов напольных покрытий появляется на строительном рынке, тем порой труднее сделать оптимальный выбор, потому что человек просто теряется в характеристиках. Несмотря на широкий ассортимент новинок, могут быть использованы и самые простые материалы, что также позволит сделать нормальное напольное покрытие.

Как это ни удивительно, неплохой пол можно получить из OSB-плит, если их правильно подобрать и уложить, а также использовать соответствующее покрытие.

OSB-плиты, которые подходят для пола.

Плита может быть разной толщины в зависимости от слоев дерева, которые укладывают особым образом, чтобы повысить ее прочность. Наиболее тонкие плиты имеют лишь три слоя, но они все равно считаются значительно более качественными, чем ДСП. Помимо этого, OSB-плиты намного лучше выдерживают сами крепежи и сопротивляются влаге.

Все плиты OSB подразделяются на три класса по своим характеристикам, от которых и стоит отталкиваться при выборе.

1-класс – очень тонкий и хрупкий материал, который предназначен для внутренней облицовки в сухих помещениях и использования в качестве упаковки. Совершенно не переносит влагу.

2-класс в основном используется для создания мебели. Хоть этот материал и может несколько лучше выдерживать влагу, для пола он не подходит.

3-класс плит отличается хорошей влагостойкостью и толщиной, потому их можно укладывать в качестве напольного покрытия. Помимо этого, они подходят как для внутренних, так и для наружных работ.

Что касается толщины плит, то она может варьироваться от 9 до 18 мм. Если основа пола ровная или имеет только небольшие изъяны и изгибы, то подойдет плита толщиной 9 мм, но с тем условием, что на такой пол не будет ставиться тяжелая мебель или оборудование. В противном случае рекомендуется выбирать плиты толщиной 15-18 мм.

Если плиты укладывают на лаги, толщина подбирается по специальной таблице размеров в зависимости от промежутка между лагами.

Также, если полы будут укладываться на лаги, рекомендуется предварительно просчитать стоимость в плане выгоды. Имеется в виду приобретение более толстых плит или укладка тонких плит в несколько слоев. В зависимости от размера помещения и промежутка между лагами, выгода и цена покрытия могут варьироваться.

Есть случаи, в которых OSB-плиты нельзя использовать для монтажа.

Плиты целиком состоят из дерева, поэтому, независимо от финального покрытия, они не подходят для помещений с высокой влажностью, поскольку не могут полностью противостоять воздействию влаги в помещении.

В слишком горячих помещениях или с системой горячего пола их также не рекомендуется укладывать, так как при нагревании с плит будут выделяться смолы и токсичные вещества, которые вредны для здоровья.

Они плохо проводят тепло, а значит, не годятся для использования при наличии напольного отопления.

Укладывать плиты можно как на лаги, так и на бетонную основу, а крепятся они саморезами или гвоздями.

В целом, из OSB может выйти качественный пол, если климат в помещении удовлетворительный, а плиты дополнительно будут покрыты слоем грунта.

Плиты ОСП 1250*2500 1220*2440 | Для кровли и фасадов

Годом создания плиты ОСП считается 1982. Компания производитель «Пеликан Сомилз Лимитед»(Канада).

Плита ОСП по сути своей является ни чем иным, как фанерой хвойной, отличной от нее лишь по структуре и связующему. На первый взгляд может показаться, что в плитах ОСП стружка расположена хаотично и никак не упорядочено, на самом деле это не так. Узкая и длинная стружка плит ОСП уложена в несколько слоев перпендикулярных друг другу. Благодаря независимому положению компонентов в плите нет сосредоточения напряжения и как следствие со временем плита ОСП не деформируется. ОСП ничем не уступает по техническим характеристикам фанере.

Как правило пирог плиты укладывается в три слоя. В перспективе возможно производство плит с внутренним слоем из ОСП и внешними слоями из МДФ.

 Так как ОСП состоит практически из отходов деревопереработки, она имеет низкую себестоимость и неограниченный источник сырья.

ОСП принадлежит большой процент рынка плитных материалов, она является основным материалом для великого множества продуктов самых разных отрослей.

Благодаря специальным режимам сушки и усовершенствованным формулам связующего вещества, улучшенным вентиляционным системам, производство ОСП является экологически безопасным.

ОСП имеет весьма привлекательный декоративный вид.

Сочетая в себе все выше упомянутые достоинства, плиты ОСП являются достойным конкурентом известным нам плитным древесным материалам.

ТЕХНИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ПЛИТЫ ОСП

Габаритные размеры, мм	1220*2440 1250*2500
Толщина, мм	от 6-40
Сорт плиты ОСП	ОСП-1, ОСП-2, ОСП-3, ОСП-4
Тип поверхности	Нешлифованная
Влагостойкость	Водостойкая, обычная
Влажность, %, в пределах	2-12
Класс эмиссии формальдегида	Е 1
Качество продукции соответствует требованиям	ГОСТ 32567-2013

ПОКАЗАТЕЛИ ИСПЫТАНИЙ ПЛИТЫ ОСП

Показатель	Стандартное значение
Предел прочности при изгибе по главной оси , МПа, не менее	22
Модуль упругости при изгибе главная ось, МПа, не менее	3500
Предел прочности при изгибе по второстепенной оси, МПа, не менее	11
Модуль упругости при изгибе второстепенная ось, МПа, не менее	1400
Предел прочности при растяжении перпендикулярно к пласти плиты после кипячения, МПа, не менее	0,15
Разбухание по толщине за 24 часа, %, не более	15
Предел прочности при растяжении перпендикулярно к пласти плиты, МПа, не менее	0,34

Variola Virus – обзор

XVIII. ВАРИОЛА (ОСПА)

Вирус натуральной оспы, вызывающий оспу, больше не является эндемичным ни в одной части мира. Однако нынешний страх перед биотерроризмом побудил многие страны взглянуть на свою готовность в случае распространения вируса натуральной оспы среди населения. Вариола – возбудитель, против которого не существует эффективных лекарств. Продолжительность защиты, обеспечиваемой существующей противооспенной вакциной (на основе живого аттенуированного вируса осповакцины), достоверно неизвестна.Однако незначительные вспышки оспы, которые произошли в развитых странах с середины 19 до середины 20 века, позволяют предположить, что риск заболевания при контакте с оспой через 10–20 лет после вакцинации является значительным, хотя показатели смертности могут быть снижены. Поэтому отрезвляет осознание того, что большая часть населения мира не была вакцинирована более 20 лет, и что молодое поколение никогда не проходило вакцинацию. Более того, существующая вакцина небезопасна для людей с ослабленным иммунитетом, которые из-за ВИЧ сейчас присутствуют в большом количестве по всему миру.Даже среди общего населения, иммунизированного в Соединенных Штатах в 1960-х годах, были зарегистрированы сотни осложнений и несколько смертей, что является показателем безопасности, который был бы неприемлем по сегодняшним стандартам вакцинации. Поэтому многие считают, что необходимо разработать новую, более безопасную вакцину против оспы.

К сожалению, серьезное этическое препятствие, которое не стояло на пути Дженнера, стало серьезной проблемой для современных исследователей вакцин. По своей природе оспа – это чисто человеческое заболевание, а это означает, что у исследователей нет модели на животных, чтобы проверить эффективность любых новых разработанных вакцин-кандидатов.Исследователи усердно пытаются найти комбинацию исследуемых видов и пути введения натуральной оспы, которые приведут к заболеванию, сходному с оспой, у животного. Тем временем большинство стран решили пополнить свои запасы противооспенной вакцины существующими стандартными штаммами вакцин. В настоящее время считается, что вакцинация должна проводиться не в случае массовых вакцинаций, а в тех случаях, когда известно, что люди были подвержены заражению вирусом натуральной оспы. Поскольку вирус реплицируется медленно, зараженные люди могут быть вакцинированы спустя 4 дня, и при этом у них по-прежнему развиваются иммунные ответы, необходимые для победы над вирусом. Также будут вакцинированы лица, непосредственно контактировавшие с инфицированными людьми, а также работники здравоохранения, вовлеченные в этот случай. Это ограничение размера вакцинированного населения может сделать риски, присущие вакцинации против оспы, более приемлемыми.

Там, где разрабатываются улучшенные противооспенные вакцины, практическую озабоченность вызывает наличие живой натуральной оспы для использования как в испытаниях на животных, так и в клинических испытаниях. Поскольку искоренение оспы твердо установлено, ВОЗ рекомендовала уничтожить все оставшиеся запасы натуральной оспы к июню 1999 г.Однако было решено сохранить два запаса образцов для исследовательских целей в безопасных местах в Соединенных Штатах и ​​России до 2002 года, после чего все оставшиеся образцы вируса натуральной оспы подлежали уничтожению. Осенью 2001 года это решение было отменено. Фактически, среди экспертов в этой области продолжают бушевать ожесточенные споры относительно судьбы этих запасов. Сохранению благоприятствуют те, кто считает, что повторное появление оспы могло произойти из-за случайного или преднамеренного выброса незаявленных запасов.Они считают, что наличие вируса натуральной оспы для тестирования новых, улучшенных вакцин и возможных лекарств от натуральной оспы гарантирует сохранение вируса в строго контролируемых условиях. Сторонники уничтожения двух официальных запасов утверждают, что существующие вакцины на основе осповакцины достаточно эффективны, и, поскольку секвенирование геномной ДНК репрезентативных штаммов натуральной оспы завершено, нет никаких научных оснований для продолжения (потенциально угрожающего) существования вируса натуральной оспы. две акции.

Происхождение и геномное разнообразие штаммов противооспенной вакцины времен Гражданской войны в США | Геномная биология

1.

Кастро Р., Казанас Б. Ортопоксвирусы и болезни человека. Нью-Йорк: В: Глобальная вирусология II-ВИЧ и NeuroAIDS. Springer; 2017. с.689–697.

2.

Fenner F, Henderson DA, Arita I, Jezek Z, Ladnyi ID. Оспа и ее искоренение. Vol. 6. Всемирная организация здравоохранения, Женева; 1988.

3.

Hopkins DR. Величайший убийца: оспа в истории.Чикаго: Издательство Чикагского университета; 2002.

4.

Дженнер Э. Исследование причин и последствий вакцины против натуральной оспы: болезни, обнаруженной в некоторых западных графствах Англии, особенно в Глостершире, и известной под названием коровья оспа. Лондон: Отпечатано для автора Самсоном Лоу, № 7, Бервик-стрит, Сохо; 1798.

5.

Esparza J, Schrick L, Damaso CR, Nitsche A. Equination (прививка от оспы): ранняя альтернатива вакцинации (прививка от коровьей оспы) и потенциальная роль вируса оспы лошадей в происхождении оспы вакцина.Вакцина. 2017; 35 (52): 7222–30.

CAS PubMed Статья Google ученый

6.

Schrick L, Tausch SH, Dabrowski PW, Damaso CR, Esparza J, Nitsche A. Ранняя американская вакцина против оспы, основанная на конской оспе. N Engl J Med. 2017; 377 (15): 1491–2.

PubMed Статья Google ученый

7.

Martin HA. Отчет о вакцинации животных. Trans Am Med Assoc. 1877; XXVII: 187–248.

8.

Funkhouser WK. Эдвард Дженнер и вакцинация: путь к ликвидации эпидемии натуральной оспы. Am Soc Investigative Pathol. 2010. 5 (3): 8–10.

9.

Baxby D, Gaskell C, Gaskell R, Bennett M. Экология ортопоксвирусов и использование рекомбинантных вакцин против осповакцины. Ланцет. 1986. 328 (8511): 850–1.

Артикул Google ученый

10.

Бэксби Д., Беннетт М., Гетти Б. Коровья оспа человека 1969–93: обзор, основанный на 54 случаях.Br J Dermatol. 1994. 131 (5): 598–607.

CAS PubMed Статья Google ученый

11.

Esparza J. Вымерла ли конская оспа? Vet Rec. 2013. 173 (11): 272–3.

PubMed Статья Google ученый

12.

Дауни А.В. Исследование поражений, вызванных экспериментально вирусом коровьей оспы. J Pathol Bacteriol. 1939; 48: 361–79.

Артикул Google ученый

13.

Дауни AW. Иммунологические отношения вируса спонтанной коровьей оспы к вирусу коровьей оспы. Br J Exp Pathol. 1939; 20: 158–76.

PubMed Central Google ученый

14.

Баксби Д. Хозяева и резервуары поксвируса. Arch Virol. 1977; 55 (3): 169–79.

CAS PubMed Статья Google ученый

15.

Бэксби Д. Происхождение вируса коровьей оспы. J Infectious Dis.1977 г., 136 (3): 453–5.

CAS Статья Google ученый

16.

Цинь Л., Аптон С., Хейз Б., Эванс Д.Х. Геномный анализ вариантов штамма вируса осповакцины, обнаруженных в вакцине Dryvax. J Virol. 2011. 85 (24): 13049–60.

CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

17.

Цинь Л., Фавис Н., Фамульски Дж., Эванс Д.Х. Эволюция и эволюционные отношения между существующими штаммами вируса осповакцины.J Virol. 2015; 89 (3): 1809–24.

PubMed Статья Google ученый

18.

Санчес-Сампедро Л., Пердигеро Б., Мехиас-Перес Е., Гарсия-Арриаса Дж., Ди Пилато М., Эстебан М. Эволюция вакцин против поксвируса. Вирусы. 2015; 7 (4): 1726–803.

PubMed PubMed Central Статья Google ученый

19.

Противооспенная вакцина Бэксби Д. Дженнера. Загадка происхождения вируса коровьей оспы.Heinemann Lond. 1981; 12: 997–1035.

Google ученый

20.

Харрис Э. Вакцинация в армии. В: Флинт А., редактор. Вклады, касающиеся причинно-следственной связи и профилактики заболеваний. Нью-Йорк: Санитарная комиссия США / Hurd and Houghton; 1867.

Google ученый

21.

Управление генерала Дурджена США. В кн .: Медицинская и хирургическая история войны против восстания.Вашингтон, округ Колумбия, Государственная типография США. 1888. Доступно по адресу: http://resource.nlm.nih.gov/14121350R.

22.

Джонс Дж. Исследования «ложной вакцинации»: или аномальных явлений, сопровождающих и последовавших за вакцинацией в армии конфедератов во время недавней Гражданской войны в США 1861–1865 гг. Vol. 1376. Нэшвилл: Университетская медицинская пресса; 1867.

23.

Хикс Р. Скаброзные вопросы: ложная вакцинация в конфедерации. В: Кашин Дж., Редактор.Чапел-Хилл: Война имеет значение: материальная культура эпохи гражданской войны. Пресса Университета Северной Каролины; 2018: 123–150.

24.

Ондов Б.Д., Бергман Н.Х., Филлиппи А.М. Интерактивная метагеномная визуализация в веб-браузере. BMC Bioinformatics. 2011; 12 (1): 385.

PubMed PubMed Central Статья Google ученый

25.

Wickham H. ggplot2: элегантная графика для анализа данных. Нью-Йорк: Спрингер-Верлаг; 2016 г.Доступно по адресу: http://ggplot2.org.

Google ученый

26.

Скоглунд П., Сторо Дж., Гетерстрём А., Якобссон М. Точная идентификация пола древних человеческих останков с использованием секвенирования ДНК с дробовиком. J Archaeol Sci. 2013. 40 (12): 4477–82.

CAS Статья Google ученый

27.

Деволт А.М., Мортимер Т.Д., Китчен А, Кизеветтер Х, Энк Дж. М., Голдинг Дж. Б., Саутон Дж., Куч М., Дугган А. Т., Эйлвард В., Гарднер С. Н., Аллен Дж. Э., Кинг А. М., Райт Дж. , Курода М. , Като К., Бриггс ДЭГ, Форнасиари Дж., Холмс Е.С., Пойнар Х.Н., Пепперелл К.С.Молекулярный портрет материнского сепсиса из Византийской Трои. Элиф. 2017; 6: e20983.

PubMed PubMed Central Статья Google ученый

28.

Тульман Э, Делхон Г, Афонсо Ц, Лу З., Жак Л, Сандыбаев Н, Керембекова У. Геном вируса оспы. J Virol. 2006. 80 (18): 9244–58.

CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

29.

Alcamí A, Smith GL. Рецепторы гамма-интерферона, кодируемые поксвирусами: значение для неизвестного происхождения вируса коровьей оспы. Trends Microbiol. 1996. 4 (8): 321–6.

PubMed Статья Google ученый

30.

Gubser C, Hue S, Kellam P, Smith GL. Геномы поксвирусов: филогенетический анализ. J Gen Virol. 2004. 85 (1): 105–17.

CAS PubMed Статья Google ученый

31.

Damaso CR, Esposito JJ, Condit RC, Moussatché N. Эмерджентный поксвирус от людей и крупного рогатого скота в штате Рио-де-Жанейро: вирус Кантагало может быть получен из бразильской вакцины против оспы. Вирусология. 2000. 277 (2): 439–49.

CAS PubMed Статья Google ученый

32.

Medaglia MLG, Moussatché N, Nitsche A, Dabrowski PW, Li Y, Damon I.K., Lucas CG, Arruda LB, Damaso CR. Геномный анализ, фенотип и вирулентность исторического бразильского штамма вакцины против оспы IOC: значение для происхождения и эволюционных взаимоотношений вируса осповакцины.J Virol. 2015; 89 (23): 11909–25.

CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

33.

Damaso CR. Возвращаясь к загадкам Дженнер, о роли лимфы Божанси в эволюции древних противооспенных вакцин. Ланцетная инфекционная болезнь. 2017; 18 (2): e55–63.

Артикул Google ученый

34.

Кондас А.В., Олсон В.А., Ли Й., Абель Дж., Лейкер М., Роуз Л., Уилкинс К., Тернер Дж., Клайн Р., Дэймон И.К.Специфические диагностические анализы вируса натуральной оспы: характеристика, чувствительность и специфичность. J Clin Microbiol. 2015; 53 (4): 1406–10.

CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

35.

Ли Й, Олсон В.А., Лауэ Т., Лейкер М.Т., Дэймон И.К. Обнаружение вируса оспы обезьян с помощью ПЦР в реальном времени. J Clin Virol. 2006. 36 (3): 194–203.

CAS PubMed Статья Google ученый

36.

Li H, Durbin R. Быстрое и точное согласование коротких считываний с преобразованием Барроуза – Уиллера. Биоинформатика. 2009. 25 (14): 1754–60.

CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

37.

Рено Г., Слон В., Дугган А. Т., Келсо Дж. Шмуци: оценка загрязнения и эндогенного митохондриального консенсуса, требующего древней ДНК. Genome Biol. 2015; 16 (1): 224.

PubMed PubMed Central Статья Google ученый

38.

ван Овен М. PhyloTree Build 17: выращивание дерева митохондриальной ДНК человека. Forensic Sci Int. 2015; 5: e392–4.

Google ученый

39.

Weissensteiner H, Pacher D, Kloss-Brandstätter A, Forer L, Specht G, Bandelt H-J, Kronenberg F, Salas A, Schönherr. HaploGrep 2: классификация митохондриальных гаплогрупп в эпоху высокопроизводительного секвенирования. Nucleic Acids Res. 2016; 44 (W1): W58–63.

CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

40.

Като К., Стэндли DM. Программное обеспечение MAFFT для множественного выравнивания последовательностей, версия 7: улучшения производительности и удобства использования. Mol Biol Evol. 2013. 30 (4): 772–80.

CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

41.

Талавера Г., Кастресана Дж. Улучшение филогении после удаления расходящихся и неоднозначно выровненных блоков из выравнивания последовательностей белков. Syst Biol. 2007. 56 (4): 564–77.

CAS PubMed Статья Google ученый

42.

Гиндон С., Дюфаярд Дж.Ф., Лефорт В., Анисимова М., Хордейк В., Гаскуэль О. Новые алгоритмы и методы для оценки филогении максимального правдоподобия: оценка производительности PhyML 3.0. Syst Biol. 2010. 59 (3): 307–21.

CAS PubMed Статья Google ученый

43.

Чжоу З., Алихан Н.Ф., сержант М.Дж., Луманн Н., Ваз С., Франсиско А.П., Каррисо Дж.А., Ахтман М. GrapeTree: визуализация основных геномных отношений между 100000 бактериальных патогенов.Genome Res. 2018; 28 (9): 1395–404.

CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

Изучение возможности заражения вирусом натуральной оспы макак яванского макака в качестве модели оспы человека

Аннотация

Вирус оспы (натуральной оспы) представляет серьезную угрозу как возбудитель биотерроризма. Чтобы снизить этот риск, срочно необходимы противовирусные препараты и улучшенная вакцина.Удовлетворительная демонстрация защитной эффективности против натуральной натуральной оспы потребует разработки модели на животных, в которой натуральная оспа вызывает течение болезни с характеристиками, соответствующими натуральной оспе человека. С этой целью макаки cynomolgus были подвергнуты воздействию нескольких штаммов натуральной оспы через аэрозоль и / или внутривенно. маршруты. Два штамма, Harper и India 7124, вызывали одинаковую острую летальность при внутривенном введении. в высоких дозах (10 ⁹ бляшкообразующих единиц). Более низкие дозы приводили к менее фульминантным системным заболеваниям и снижению смертности.У умерших животных был выраженный лейкоцитоз, тромбоцитопения и повышенный уровень креатинина в сыворотке. После инокуляции оспа была диссеминирована посредством моноцитарной клеточно-ассоциированной вирусемии. Распределение вирусных антигенов с помощью иммуногистохимии коррелировало с присутствием реплицирующихся вирусных частиц, продемонстрированных электронной микроскопией, и патологией в лимфоидных тканях, коже, слизистой оболочке полости рта, желудочно-кишечном тракте, репродуктивной системе и печени. Эти частицы напоминали частицы оспы человека.Высокая вирусная нагрузка в тканях-мишенях была связана с дисфункцией органов и мультисистемной недостаточностью. Свидетельства активации каскада свертывания (D-димеры) подтвердили гистологические признаки геморрагического диатеза. Истощение Т-клеточно-зависимых областей лимфоидных тканей произошло, вероятно, как следствие сторонних апоптотических механизмов, инициированных инфицированными макрофагами. Выработка цитокинов, включая IL-6 и IFN-γ, способствует цитокиновому шторму, ранее известному как «токсемия». Более точное понимание патогенеза заболевания должно обеспечить цели для терапевтического вмешательства, которое будет использоваться отдельно или в комбинации с ингибиторами репликации вируса натуральной оспы.

S оспа широко считается серьезной угрозой биотерроризма (1). По иронии судьбы, неожиданным последствием глобальной кампании Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) по ликвидации оспы (2) стало создание в значительной степени уязвимого населения; в Соединенных Штатах плановая вакцинация против оспы была прекращена в 1976 году. Для смягчения последствий нападения оспы серьезное внимание уделяется вакцинации больших слоев населения; однако обычная вакцинация вызывает значительную частоту побочных реакций, и, таким образом, исключается ряд слоев населения.Необходимость в защитной, но менее реактогенной вакцине очевидна, и весьма желательно наличие противовирусного препарата для лечения лиц, подвергшихся воздействию вируса оспы (натуральной оспы).

Для удовлетворения этих потребностей в исследованиях работа с этим вирусом была рекомендована исследовательской группой Института медицины США в 1999 г. (3), а план исследований был одобрен ВОЗ в соответствии с Резолюцией 52.10 (4) ВОЗ по разработке животных. модель с использованием аутентичного вируса натуральной оспы. Обоснованием этой инициативы было выполнение требований U.S. Правило по эффективности животных (5) Управления по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов (FDA), которое было установлено для облегчения утверждения терапевтических стратегий и вакцин для микробных агентов, когда получение данных об эффективности у людей непрактично или неэтично. В случае вируса оспы, который больше не встречается в человеческих популяциях, единственный вариант продемонстрировать защитную эффективность – это модель на животных. Правило FDA по эффективности животных требует, чтобы использовался подлинный агент (в данном случае, натуральная оспа) и чтобы процесс заболевания соответствовал человеческому заболеванию.Конечная точка исследования должна основываться на снижении заболеваемости или смертности. При оценке мер противодействия оспе соблюдение этих требований особенно сложно. В природе нет животных-резервуаров вируса натуральной оспы, и большинство видов животных невозможно заразить даже в лаборатории (2). Попытки разработать на приматах модели инфекции и болезни натуральной оспы в 1960-х годах имели лишь ограниченный успех (6, 7). Однако модифицированный штамм осповакцины Ankara был лицензирован в то время для использования в Германии на основании уменьшения симптоматики у приматов, подвергшихся воздействию натуральной оспы (8).Вдохновленная этими новаторскими исследованиями, наша межведомственная группа (9) попыталась создать смертельную модель настоящей натуральной оспы, подвергнув макак яванского макака воздействию ряда штаммов натуральной оспы в высоких дозах различными путями. Первоначальным ограничением, установленным Резолюцией 52.10 ВОЗ, было завершение этой работы до декабря 2002 г. В предварительных сообщениях (9, 10) мы сообщили о результатах воздействия на две группы обезьян штаммов Yamada и Lee, вводимых в виде мелкодисперсных аэрозолей. (аналогично нападению с применением биологического оружия).Ни у одной из обезьян, подвергшихся воздействию максимально достижимой дозы аэрозоля [10 ^8,5 бляшкообразующих единиц (БОЕ)] любого штамма, не развилось серьезное заболевание, хотя все подвергшиеся воздействию животные действительно заразились. В связи с быстрым приближением крайнего срока ВОЗ в декабре 2002 г., нашей первоочередной задачей было выявление системного заболевания; Таким образом, мы выбрали два дополнительных штамма натуральной оспы (Harper и India 7124) и подвергли обезьян воздействию как аэрозольного вируса (10 ⁸ БОЕ), так и внутривенного введения. прививка (10 ⁹ БОЕ) для максимального увеличения вероятности развития серьезного системного заболевания с признаками человеческой оспы.Мы достигли этой цели, хотя для более точного моделирования всего спектра болезней человека требуются дальнейшие разработки. Эти начальные испытания, а также последующие исследования развития с использованием i.v. только маршрут, являются предметом данного отчета.

Материалы и методы

Воздействие оспы на обезьян. Тридцать шесть обезьян cynomolgus ( Macaca fascicularis ) подверглись воздействию одного из двух штаммов натуральной оспы, Harper и India 7124.Перед включением в исследование все животные были клинически здоровыми и имели отрицательные результаты тестов на обезьяний ретровирус, вирус Т-клеточной лейкемии обезьян, вирус иммунодефицита обезьян и антитела против вируса осповакцины; оба посевных материала натуральной оспы были приготовлены как материалы третьего пассажа из хориоаллантоисных мембран в клетках BSC-40 и обработаны, как описано в вспомогательном тексте , который опубликован в качестве вспомогательной информации на веб-сайте PNAS. Аэрозоли содержали частицы размером от 1 до 3 мкм, как описано для вируса оспы обезьян (11).Использование i.v. облучение проводилось через бедренную вену в объеме 1,0 мл. Восемь животных заражали комбинацией аэрозоля и внутривенного введения. инокуляция, четыре штамма Harper и четыре штамма India. Дополнительных животных подвергали внутривенному воздействию. к одному вирусу в различных дозах (таблица 1). Животных осматривали ежедневно после воздействия. Во время исследования животным вводили седативную терапию комбинацией тилетамин-золазепам (3-6 мг / кг, внутримышечно с телазолом, А.Х. Роббинс, Ричмонд, штат Вирджиния) и брали кровь с интервалами в 2-3 дня для гематологии, клинической химии, серологии. , и изоляция вирусов.Все эксперименты на животных, проведенные для этого исследования, соответствовали рекомендациям Национального института здоровья.

Таблица 1. Распределение смертности макак cynomolgus, подвергшихся воздействию штаммов натуральной оспы

Гематология, тесты на коагуляцию и биохимия. Общее количество лейкоцитов, дифференциальное количество лейкоцитов, количество красных кровяных телец, количество тромбоцитов, гематокриты, общий гемоглобин, средний объем клеток, средний корпускулярный объем и средние концентрации корпускулярного гемоглобина определялись из образцов крови, собранных в ЭДТА, с использованием Акт 10 Coulter Counter (Coulter Electronics, Hialeah, FL).Химический состав сыворотки определяли с использованием анализатора крови Piccolo (Abaxis, Саннивейл, Калифорния). Уровень D-димеров (продуктов разложения фибрина) исследовали с помощью ELISA в соответствии с инструкциями производителя (Asserachrom D-Di, Diagnostica Stago, Parsippany, NJ).

Производство цитокинов / хемокинов. Уровни IFN-α, IFN-γ, фактора некроза опухоли α, IL-6, хемоаттрактантного белка моноцитов 1, воспалительного белка макрофагов 1α и воспалительного белка макрофагов 1β в сыворотке / плазме обезьян анализировали с помощью ELISA в соответствии с инструкциями производителя (BioSource International, Камарильо, Калифорния).

Вскрытие трупа. Было проведено полное вскрытие трупов всех животных либо сразу после смерти от инфекции, либо после гуманного умерщвления неизлечимо больных или умирающих животных в соответствии с установленными правилами. Животных, которые заболели клинически и впоследствии выздоровели, умерщвляли и вскрывали через 21 день после контакта. Ткани всех основных органов были собраны для гистопатологии и иммуногистохимии.

Гистология, иммуногистохимия и окрашивание, опосредованное терминальной дезоксинуклеотидилтрансферазой dUTP Nick End Labeling (TUNEL). Ткани, которые фиксировали погружением в 10% нейтральный буферный формалин на минимум 48 часов, подвергали 2 × 10 ⁶ рад в облучателе ⁶⁰ Co для обеспечения инактивации вирусов. Вирусный антиген был иммуногистохимически локализован с помощью поликлонального антитела, направленного против вируса осповакцины (любезно предоставлено B. Moss, Национальные институты здравоохранения, Bethesda), с использованием ранее описанных методов и фиксированных формалином, залитых парафином тканей (12-14). Клетки-мишени идентифицировали с помощью поликлональных вакцинных антител в сочетании с различными клеточными маркерами.Антитела к фактору фон Виллебранда использовали в качестве маркеров эндотелиальных клеток, а маркер поликлональных макрофагов, Ab-1 (Oncogen Research Products, Сан-Диего), использовали для идентификации моноцитов / макрофагов. Апоптотические клетки выявляли с помощью анализа TUNEL (Apoptag, Intergen, Purchase, NY). Отобранные клетки-мишени были идентифицированы с использованием маркера пан-В-клеток, CD20 (DAKO), маркера пан-Т-клеток, CD3 (DAKO), маркера поликлональных макрофагов или маркера эндотелиальных клеток (фактор фон Виллебранда, DAKO) в сочетании с Тест TUNEL.Наличие апоптотических клеток в тканях подтверждено ультраструктурным исследованием.

Ультраструктура. Ткани, собранные для ультраструктурного исследования, фиксировали 2,5% глутаровым альдегидом на 0,1 М фосфатном буфере (pH 7,3), облучали (5 × 10 ⁶ рад) и обрабатывали, как описано (14). Вырезали ультратонкие срезы, помещали на медные сетки для электронной микроскопии с размером ячеек 200 меш, окрашивали уранилацетатом и цитратом свинца и исследовали с помощью просвечивающего электронного микроскопа Philips.

Выделение вируса из крови и тканей. Инфекционный вирус в тканях и циркулирующих клетках анализировали путем подсчета бляшек на монослоях Vero-E6, как описано (15). Вкратце, на монослои клеток Vero E6 накладывали серийные разведения 10% гомогенатов органов или суспензий разрушенных клеток. После 1-часовой абсорбции среду заменяли, и планшеты инкубировали в течение 3-4 дней и окрашивали 1,3 мг / мл кристаллического фиолетового, 5% этанола и 30% формалина.Через 20 мин планшеты промывали и сушили и подсчитывали шесть бляшек.

Результаты

В отличие от предыдущего опыта (9), оба штамма натуральной оспы вызвали быстрое молниеносное заболевание с почти одинаковой летальностью и поражениями на конечной стадии, напоминающими человеческое заболевание, у обезьян, подвергшихся воздействию комбинации аэрозоля и внутривенного введения. маршруты. Три из четырех обезьян, подвергшихся воздействию штамма Harper, умерли (дни 4, 4 и 6), и все четыре обезьяны, подвергшиеся воздействию штамма India 7124, погибли (дни 3, 3, 4 и 13) (см. Таблицу 2, которая опубликована в качестве вспомогательной информации на веб-сайте PNAS).Чтобы определить, есть ли в / в. Одной инокуляции было достаточно для получения летальности, мы инокулировали еще четырех обезьян штаммом India (10 ⁹ БОЕ внутривенно) и получили однородную летальность (дни 3, 3, 4 и 6). Таким образом, мы продемонстрировали фундаментальное наблюдение, что можно добиться летального заражения приматов с помощью вируса натуральной оспы. Чтобы определить, вызывают ли более низкие дозы вируса менее быстрое течение болезни, мы титровали штамм India на летальность для обезьян, подвергая животных i.v. до различных 10-кратных разведений. В этой серии умерла только одна из двух обезьян, получивших 10 ⁹ БОЕ; ни один из тех, кто получил 10 ⁸ БОЕ или более низкие дозы, не умер, хотя серьезность объективных маркеров заболевания действительно снизилась в зависимости от дозы (см. ниже). Аналогичным образом, штамм Harper был равномерно летальным при 10 ⁹ БОЕ внутривенно, но только одно из трех животных погибло при дозе, в 10 раз меньшей (таблица 1).

Общие показатели лейкоцитов в периферической крови были заметно повышены у обезьян, умерших остро; дифференциальный подсчет выявил моноцитоз> 20% у тех, кто умер до 6 дня (рис.1 a ). Пик лейкоцитоза наступил позже у обезьян, которые жили дольше. Временное снижение количества тромбоцитов наблюдалось у всех остро инфицированных животных, хотя редко до уровней <100000 на микролитр (рис. 1 b ). Инфекционный вирус выделяли из моноцитов периферической крови в течение 2 дней после инокуляции, но никогда в бесклеточной плазме. Титры варьировались от 10 ² до 10 ⁶ БОЕ на 10 ⁶ клеток и со временем увеличивались.Инфекционный вирус также был легко выделен из мазков из ротоглотки (рис. 1 c ). В то время как мазки, полученные сразу после воздействия аэрозоля, могли содержать инокулят-вирус, титры после 3-го дня, вероятно, представляли потомство, реплицирующееся в глотке, как и титры от животных, инокулированных в / в. в еще более ранние моменты времени.

Инжир.1.

Общее количество лейкоцитов у обезьян, инфицированных штаммами оспы Harper и India ( a ), количество тромбоцитов в плазме от инфицированных обезьян ( b ), титры инфекционных вирусов, полученные из мазков из горла инфицированных обезьян ( c ), и количество поражений кожи в зависимости от дозы вируса (штамм India) ( d ). Оценка поражений: 3,> 500 очагов поражения; 2, 50-500 очагов; 1, 1-50 очагов.

Клинически эти обезьяны показали кожную эритему и кожное кровоизлияние уже на 2-й день.К 3 дню было очевидным раннее развитие пузырьков и пустул. У всех животных в течение 3 дней развилась лихорадка, за которой последовали анорексия, кашель и поражения кожи, характеризующиеся центробежным распределением с концентрацией на конечностях. Многие из этих черт напоминали те, что описывались у людей в прошлом. Количество кожных повреждений менялось в зависимости от дозы. У животных, которые подверглись воздействию самых высоких доз вируса (10 ⁹ и 10 ⁸ БОЕ) и которые жили после 7-го дня, постоянно развивалось более 500 поражений (рис.1 д ). При аутопсии, помимо кожного кровоизлияния, наблюдались признаки коагулопатии, которые включали геморрагические выпоты в грудной и брюшной полостях и передней камере глаза, в дополнение к висцеральным и слизистым кровоизлияниям.

Значения клинического химического состава обезьян, привитых штаммами натуральной оспы Harper или India, приведены по дням для отдельных животных (таблицы 3 и 4, которые публикуются в качестве дополнительной информации на веб-сайте PNAS).Уровни трансаминаз в сыворотке заметно повысились к 4-му дню у обезьян, подвергшихся воздействию штамма India; Азот мочевины крови и креатинин также были заметно повышены в период, предшествующий смерти. Устойчивое снижение уровня сывороточного альбумина при стабильных значениях общего белка свидетельствует о синдроме утечки капилляров.

Патологоанатомическое исследование было выполнено на всех животных. Оценка инфекционной вирусной нагрузки в органах обезьян при вскрытии выявила титры вирусов, значительно превышающие инокулят, от 10 ⁵ БОЕ / г мозга до> 10 ⁹ БОЕ / г в надпочечниках, почках, селезенке и печени. .Подробный отчет о патологических находках будет представлен отдельно (M.J.M., L.E.H., J.W.H., W. Shieh, S. Zaki и P.B.J., неопубликованная работа). Короче говоря, многие органы демонстрировали признаки диффузных петехиальных кровоизлияний на серозных поверхностях (рис. 2 a ). ), а также сильную заложенность и кровоизлияние на поверхности слизистых оболочек, часто в сочетании с геморрагическими, колическими лимфатическими узлами (рис. 2 b ). Везикулярные и пустулезные образования прорезывались синхронно центробежно, их количество больше на конечностях, чем на туловище (рис.2 c и d ). Пустулы также развивались на лице, и в конечном итоге они образовывались и высыхали у животных, живших более 7 дней (Рис. 2 и ). ).

Рис. 2.

Крупные поражения, связанные с заражением обезьян вирусом оспы.( a ) Кровоизлияние на серозную поверхность дистального отдела толстой кишки, обезьяна I-7, через 6 дней после воздействия. Обратите внимание на диффузные петехиальные кровоизлияния и геморрагические, колические лимфатические узлы. ( b ) Поверхность слизистой оболочки дистального отдела толстой кишки, описанная в a . Обратите внимание на сильную заложенность, кровотечение и геморрагические колики в лимфатических узлах. ( c ) Медиальная поверхность правой руки обезьяны I-4 через 9 дней после воздействия. Пустулы оспы преимущественно дискретные, время от времени сливающиеся.Повреждения Pock развивались синхронно и были более многочисленными дистально, что согласуется с центробежным распределением. ( д ). Ладонная поверхность левой руки обезьяны через 11 дней после воздействия. Отдельные и сливающиеся пустулы сохранили целостность благодаря сильно ороговевшему ладонному и пальцевому эпидермису. ( e ) Верхняя губа и ноздри яванского макака через 11 дней после воздействия. Обратите внимание на синхронное развитие пустул, некоторые из которых имеют пупок. Пустулы, образовавшиеся на слегка ороговевших поверхностях слизистой оболочки ноздрей, уже изъязвлены, что приводит к высыханию экссудата.

На микроскопическом уровне истощение лимфоцитов и дегенерация гепатоцеллюлярных и почечных канальцев были согласованными результатами. Также присутствовали отложение фибрина, тромбы и системный апоптоз лимфоцитов с вовлечением вторичных лимфоидных органов. Гистопатологическое исследование кожных поражений выявило дегенерацию и некроз эпителия, меж- и внутриклеточный отек, а также образование микровезикул и микропустул, типичных для экзантемы человека (рис.3 a ). Антигены натуральной оспы были локализованы в клетках Купфера и гепатоцитах в печени (рис. 3 b ) и проксимальных и дистальных канальцах почек (рис. 3 c ). Электронная микроскопия показала репликацию вируса в большинстве исследованных висцеральных тканей, особенно в лимфатических узлах и селезенке, а отложение фибрина часто было связано с инфицированными макрофагами в селезенке (рис. 3 d ). Зависимые от Т-лимфоцитов области лимфоидных тканей, как правило, были истощены, тогда как соседние макрофаги были продуктивно инфицированы.

Рис. 3.

Микроскопическая локализация вируса оспы в тканях инфицированных обезьян. ( a ) Иммуногистохимическая локализация антигена натуральной оспы в кожном эпидермисе в связи с гидропной дегенерацией и микровезикулами, день 3. ( b ) Локализация вариолы в гепатоцитах и ​​клетках Купфера (стрелка) печени, день 6.( c ) Антиген натуральной оспы в ассоциации с проксимальными и дистальными канальцами почек, день 6. ( d ) Электронная микрофотография гистиоцитарных клеток в селезенке с доказательствами репликации вируса в ассоциации с пластинчатыми мембранными телами и межклеточным фибрином.

Иммунофлуоресцентное исследование этих тканей выявило антигены натуральной оспы, связанные с моноцитами / макрофагами в лимфоидных тканях (рис. 4 a ) и в обращении.Помимо моноцитов / макрофагов, легко наблюдались инфицированные вирусом эндотелиальные клетки (рис. 4 b ). Окрашивание на моноциты / макрофаги (зеленый) и апоптоз (красный) выявило присутствие многочисленных макрофагов с покалывающими телами. Большинство апоптотических клеток были не моноцитами / макрофагами, а лимфоцитами. Был визуализирован редкий апоптотический моноцит / макрофаг (рис. 4 c ), и наблюдался моноцит / макрофаг с четко окрашенным неапоптотическим ядром (синий), охватывающий два отдельных апоптотических тельца (рис.4 д ).

Рис. 4.

Иммунофлуоресцентное исследование тканей нечеловеческих приматов, инфицированных натуральной оспой. ( a ) Окрашивание на моноциты / макрофаги (зеленый) и вирусный антиген (красный) указывало на присутствие инфицированных моноцитов / макрофагов (золото) в лимфоидных тканях (показан лимфатический узел) и в кровотоке.( b ) Помимо моноцитов / макрофагов, легко наблюдались инфицированные вирусом эндотелиальные клетки (зеленые). ( c ) Окрашивание на моноциты / макрофаги (зеленый) и апоптоз (красный) выявило присутствие многочисленных макрофагов, вызывающих покалывание, в лимфоидных тканях. Большинство апоптотических клеток были не моноцитами / макрофагами, а лимфоцитами. Показан редкий апоптотический моноцит / макрофаг (стрелка). ( d ) Моноцит / макрофаг с четко окрашенным неапоптотическим ядром (синий) показан поглощающим два отдельных апототических тельца.

В соответствии с геморрагическим диатезом, значения D-димера заметно увеличиваются в сыворотке инфицированных обезьян в корреляции с размером вирусного инокулята (рис. 5 a ). Воспроизведение вируса натуральной оспы в тканях-мишенях почти наверняка привело к органной недостаточности по прямым и косвенным механизмам. Репликация вируса в макрофагах часто связана с инициированием цитокинового шторма, который, однажды начавшись, может каскадировать в серию событий, в значительной степени независимых от репликации вируса.Чтобы оценить возможные компоненты такого каскада, мы измерили значения цитокинов в сыворотке обезьян с помощью иммуноанализов, разработанных для обнаружения белков человека, но известных как перекрестно-реактивные с белками макак. Резкое повышение уровня IL-8 наблюдалось у всех обследованных обезьян, инфицированных вирусом оспа (рис. 5 b ). ). Аналогичное увеличение наблюдалось для моноцитарного хемоаттрактантного белка 1, воспалительного белка макрофагов 1β, IFN-γ, IL-6 и IFN-γ (рис. 5 c-f ).

Рис. 5.

Концентрации димеров D, цитокинов и хемокинов, последовательно полученных от обезьян, инфицированных натуральной оспой. ( a ) Димеры D (мкг / мл) в сыворотках обезьян, получивших дифференцированные дозы штамма натуральной оспы India 1724 i.v. ( b ) Концентрации IL-8 (пг / мл). ( c ) Концентрации хемоаттрактантного белка 1 моноцитов (пг / мл).( d ) Концентрации воспалительного белка 1β в макрофагах (пг / мл). ( e ) Концентрации IL-6 (пг / мл) в сыворотках трех обезьян, инфицированных в / в. со штаммом Harper (10 ⁹ БОЕ). ( f ) Средние (± 1 стандартное отклонение) концентрации IFN-γ (пг / мл) в сыворотке обезьян, инфицированных в / в. со штаммами India 7124 и Harper (10 ⁹ БОЕ).

Обсуждение

Демонстрация того, что штаммы вируса натуральной оспы могут вызывать смертельную болезнь у обезьян, является значительным шагом вперед в разработке противовирусных препаратов и улучшенных вакцин, а также в улучшении понимания патогенеза натуральной оспы.Результаты снизят угрозу повторного внедрения вируса оспы в иммунологически наивную популяцию людей. С дополнительным уточнением эта модель должна позволить продемонстрировать защитную эффективность таких контрмер в соответствии с правилом эффективности животных FDA (5). I.v. Инокуляция высоких доз вируса натуральной оспы вызвала тяжелое течение геморрагической болезни, заканчивающееся острой смертью, обычно в течение 6 дней после инокуляции. В идеале модель должна включать почти однородную смертность, но более длительное среднее время до смерти, при этом развитие болезни больше напоминает обычные формы оспы, чем геморрагический тип.Наши попытки достичь этой цели с помощью более низкой дозы в 10 раз привели к снижению смертности (ноль из трех и один из трех для штаммов Harper и India, соответственно). В настоящее время компромисс – снижение смертности в пользу уменьшения кровотечений. Снижение смертности коррелировало с дозозависимым снижением клинических признаков, включая количество поражений кожи и полости рта и титры вирусов, объективные параметры, которые могут быть приняты вместо данных о смертности в соответствии с правилом эффективности животных FDA.

Использование i.v. прививка натуральной оспы эффективно затмевает инкубационную и продромальную фазы естественной инфекции натуральной оспы у людей, вызывая мгновенную виремию и системное распространение вируса в тканях-мишенях. Тем не менее, последовательность событий у обезьян похожа на геморрагическую оспу человека, форма которой почти всегда заканчивалась смертельным исходом (2). Использование этой модели для демонстрации эффективности противовирусных препаратов устанавливает высокую планку; Органы-мишени уже засеяны вирусом, тогда как при оспе человека эта эволюция происходит не раньше, чем через 10 или более дней после заражения (16).Таким образом, временное окно возможностей для эффективного вмешательства очень короткое. Усовершенствования модели, заслуживающие дальнейшего изучения, включают тестирование альтернативных путей воздействия с использованием штаммов Harper и India, включая инстилляцию через слизистую оболочку и интратрахеальную инстилляцию, хотя наши первоначальные исследования с использованием различных штаммов натуральной оспы в виде аэрозоля не увенчались успехом (9). Необходимы будущие испытания вирулентности натуральной оспы, выделенной от поздно умирающих обезьян (например, Monkey H-9), исходя из теории о том, что селективное давление могло усилить адаптированный к обезьянам штамм натуральной оспы из гетерогенного вирусного инокулята.Анализ вирусных клонов, выбранных из запасов вируса осповакцины, недавно выявил спектр фенотипов вирулентности (17). Адаптированный к обезьянам вирус натуральной оспы может вызывать системные инфекции более естественным путем и при более низких вирусных дозах.

Несмотря на свои ограничения, i.v. Описанная модель приматов натуральной оспы уже предоставила ценную информацию о патогенезе этого изысканно адаптированного патогена человека. После i.v. После инокуляции вирус натуральной оспы распространялся через моноцитарную клеточную виремию, что приводило к поражениям лимфоидных тканей, кожи, слизистой оболочки полости рта, желудочно-кишечного тракта, репродуктивной системы, почек и печени.Высокая вирусная нагрузка и связанные с ней дегенеративные изменения в тканях-мишенях способствуют дисфункции органов и мультисистемной недостаточности. Свидетельства активации каскада свертывания (D-димеры) и снижения количества тромбоцитов подтверждают гистологические доказательства геморрагического диатеза. Происходит истощение Т-клеточно-зависимых участков лимфоидной ткани, что, вероятно, является следствием сторонних апоптотических механизмов, инициированных инфицированными макрофагами (18).

Выработка цитокинов, включая IL-6, IL-8 и INF-γ, способствует цитокиновому шторму, ранее известному как «токсемия».«Более точное понимание этих медиаторов должно обеспечить цели для терапевтического вмешательства, которое будет использоваться отдельно или в комбинации с ингибиторами репликации вируса натуральной оспы. Полногеномный анализ транскрипции хозяина у этих же обезьян выявил дополнительную информацию (18).

Вирусы натуральной оспы и оспы обезьян вызывают очень похожие заболевания у обезьян и напоминают оспу у людей, хотя и с ускоренным течением болезни. Путем параллельной разработки моделей приматов как натуральной оспы, так и оспы обезьян, мы ожидаем установить связи между ними, чтобы облегчить все, кроме наиболее важных испытаний возможных контрмер на модели обезьяньей оспы, как недавно сообщалось об альтернативной вакцине против оспы (модифицированная вакцина Анкара) ( 19).Модель приматов натуральной оспы будет зарезервирована для тестирования только тех контрмер, которые соответствуют всем другим требованиям FDA для лицензирования лекарств или вакцин.

Благодарности

Мы благодарим сотрудников лабораторий Drs. Ингер Дэймон, J.W.H., Луизу Питт, Шериф Заки и Том Ксиазек, а также отделы ветеринарной медицины Научно-исследовательского института инфекционных заболеваний армии США и Центры по контролю и профилактике заболеваний за их неоценимый вклад в эту работу.

Сноски

• ↵ † Кому следует направлять корреспонденцию: штаб-квартира, Исследовательский институт инфекционных болезней армии США, 1425 Porter Street, Frederick, MD 21702-5011. Эл. Почта: peter.jahrling {at} us.army.mil.

• Сокращения: ВОЗ, Всемирная организация здравоохранения; FDA, Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США; pfu, устройство для образования налета.

• См. Комментарий на странице 14994.

• Свободно доступен онлайн через опцию открытого доступа PNAS.

• Авторские права © 2004, Национальная академия наук

Анализ ПЦР в реальном времени для обнаружения вируса оспы

РЕФЕРАТ

Мы разработали высокочувствительный и специфический анализ для быстрого обнаружения ДНК вируса оспы как на Smart Cycler, так и на Платформы LightCycler.Анализ основан на химии TaqMan с геном гемагглютинина ортопоксвируса, используемым в качестве целевой последовательности. С геномной ДНК, очищенной от вируса натуральной оспы, Бангладеш, 1975 г., предел обнаружения оценивается примерно в 25 копий на обеих машинах. Анализ был оценен в слепом исследовании с 322 закодированными образцами, которые включали геномную ДНК из 48 различных изолятов вируса натуральной оспы; 25 различных штаммов и изолятов вирусов оспы верблюдов, коровьей оспы, эктромелии, песчанок, герпеса, оспы обезьян, миксомы, кроличьей оспы, оспы енотов, скунсов, оспы оспы и ветряной оспы; и два вида риккетсиозов в концентрациях в основном от 100 фг / мкл до 1 нг / мкл.В этих 322 образцах содержалась ДНК вируса натуральной оспы, полученная из очищенных вирусных препаратов, в концентрациях от 1 фг / мкл до 1 нг / мкл. На платформе Smart Cycler были обнаружены 2 образца с ложноположительными результатами среди 116 образцов, не содержащих вирус натуральной оспы; то есть общая специфичность анализа составила 98,3%. На платформе LightCycler было обнаружено пять образцов с ложноположительными результатами (общая специфичность 95,7%). Из 206 образцов, которые содержали ДНК вируса натуральной оспы в диапазоне концентраций от 100 фг / мкл до 1 нг / мкл, 8 образцов были признаны отрицательными на платформе Smart Cycler и 1 образец считался отрицательным на платформе LightCycler.Таким образом, клиническая чувствительность составила 96,1% для инструмента Smart Cycler и 99,5% для инструмента LightCycler. Подавляющее большинство этих образцов было получено из инфицированных вирусом клеточных культур и тканей, инфицированных вирусом натуральной оспы; таким образом, ДНК-материал содержал как вирусную ДНК, так и клеточную ДНК. Из 43 образцов, которые содержали очищенную ДНК вируса натуральной оспы в концентрации от 1 фг / мкл до 1 нг / мкл, анализ правильно обнаружил вирус во всех 43 образцах как на платформах Smart Cycler, так и на платформах LightCycler.Анализ может быть полезен для раннего выявления инфекций, вызванных вирусом оспы, если такие инфекции возникли в результате умышленного или случайного рецидива.

Оспа, когда-то являвшаяся разрушительной болезнью, была ликвидирована в 1977 году, но запасы вируса натуральной оспы все еще существуют. На фоне серьезных опасений, что вирус может превратиться в биологическое оружие, прилагаются усилия по пополнению запасов вакцины и разработке новых лекарств и диагностических методов для раннего обнаружения инфекции. Основанные на ДНК методы были разработаны для раннего обнаружения и идентификации нескольких ортопоксвирусов.Эти методы включают ПЦР, секвенирование нуклеиновых кислот и анализ полиморфизма длин рестрикционных фрагментов (3, 14, 15, 16, 17, 21, 22, 23). Из этих методов секвенирование обеспечивает наивысший уровень специфичности для идентификации видов или штаммов, но доступные в настоящее время методы секвенирования еще не применимы в качестве инструментов быстрой диагностики в большинстве лабораторий. Анализ полиморфизма длин рестрикционных фрагментов также обеспечивает высокий уровень специфичности, а в сочетании с ПЦР-амплификацией он может обеспечить высокий уровень чувствительности; однако он еще не подходит для быстрой диагностики, так как включает в себя несколько высокотехнологичных этапов и может не подходить для всех типов образцов.Одним из наиболее многообещающих подходов к быстрой и чувствительной диагностике является анализ 5′-нуклеазной ПЦР в реальном времени, также известный как анализ TaqMan. Ранее мы сообщали о выборе гена гемагглютинина, гена, который отличает род Orthopoxvirus от других родов поксвирусов, в качестве подходящей последовательности-мишени для геноспецифичных тестов ПЦР (1, 2, 10, 11). ) и потенциальную полезность 5′-нуклеазных тестов для диагностики ортопоксвирусных инфекций (10, 11).Здесь мы сообщаем о разработке анализа TaqMan в реальном времени на основе гена гемагглютинина для чувствительного и специфического обнаружения вируса натуральной оспы, возбудителя натуральной оспы, на портативных устройствах обнаружения в реальном времени: инструменте Smart Cycler (Cepheid, Саннивейл, Калифорния) и прибор LightCycler (Roche Molecular Systems, Индианаполис, Индиана).

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Вирусы и подготовка ДНК. Ортопоксвирусы и контроли, использованные в исследовании (таблица 1), включали 48 изолятов вируса натуральной оспы; 25 различных штаммов и изолятов вирусов оспы верблюдов, коровьей оспы, эктромелии, песчанок, герпеса, оспы обезьян, миксомы, кроличьей оспы, оспы енотов, скунсов, оспы оспы и ветряной оспы; и два вида риккетсиозов.Происхождение, размножение и процедуры сбора этих вирусов задокументированы в другом месте (23). Инфекционные титры вируса натуральной оспы определяли с помощью анализа бляшек и составляли от 10 ⁸ до 10 ¹⁰ БОЕ / мл. ДНК экстрагировали из инфицированных вирусом клеток, вирионов и струпьев с помощью набора Aquapure DNA kit (Bio-Rad). Вкратце, 100 мкл суспензии клеточного лизата или струпа смешивали с 500 мкл буфера для лизиса Aquapure, смесь инкубировали при 55 ° C в течение 4-12 часов и охлаждали до 37 ° C и 5 мкл (12 мкг) Aquapure Добавляли раствор РНКазы.Смесь инкубировали при 37 ° C в течение 5 минут, а затем добавляли 200 мкл раствора для осаждения белка Aquapure и компоненты перемешивали встряхиванием. Образцы центрифугировали при 13000 × g в течение 20 минут, супернатанты переносили в стерильные микроцентрифужные пробирки, добавляли 600 мкл изопропанола и осаждали ДНК центрифугированием при 13000 × g в течение 5 минут. ДНК промывали один раз 70% спиртом, суспендировали в 50 мкл буфера для гидратации ДНК Aquapure и хранили при -20 ° C до использования.Предыдущие эксперименты показали, что материал не заразен после 60 мин инкубации при 55 ° C в лизисном буфере Aquapure.

ТАБЛИЦА 1.

Список ортопоксвирусов и других видов вирусов и риккетсиозов, протестированных в слепом исследовании

ПЦР-праймеры, целевые последовательности и флуорогенный зонд. Последовательности праймеров OPXJ7R3U (5′-TCATCTGGAGAATCCACAACA-3 ‘) и OPXJ7’R3L -CATCATTGGCGGTTGATTTA-3 ‘) и зонд VARJ7R3P (5′-CAAGACGTCGGGACCAATTACTAATA-3′) были выбраны из последовательности гена гемагглютинина (открытая рамка считывания J7R; номер доступа в GenBank.L22579 ) с помощью программного обеспечения Oligo (версия 5.0; National Biosciences). Праймеры были синтезированы с использованием стандартной химии фосфорамидита с синтезатором ДНК / РНК ABI 394 (Applied Biosystems). Зонд TaqMan был синтезирован Perkin-Elmer Biosystems (Фостер-Сити, Калифорния) и содержал 6-карбоксифлуоресцеин на 5′-конце и 6-карбокситетраметилродамин и фосфат на 3’-конце.

Клонирование и секвенирование фрагмента J7R вируса натуральной оспы. Фрагмент длиной 942 п.н., содержащий ген гемагглютинина, амплифицировали с помощью ПЦР из открытой рамки считывания J7R геномной ДНК вируса натуральной оспы Бангладеш 1975 года.Фрагмент клонировали в вектор pCR-Script Amp SK (+) (Stratagene, La Jolla, CA). Вкратце, амплифицированный фрагмент очищали осаждением ацетатом аммония и этанолом и ресуспендировали в 20 мкл буфера TE (Tris, EDTA), и от 2 до 4 мкл очищенной ДНК лигировали с 10 нг pCR-Script Amp SK (+ ) вектор с ДНК-лигазой Т4. Часть реакции лигирования (2 мкл) использовали для трансформации компетентных для электропорации клеток Epicurian Coli XII-Blue MRF ‘Kan. Трансформированные клетки инкубировали в среде SOC в течение 1 ч при 37 ° C, а затем высевали на чашки с агаром Лурия-Бертани, содержащим ампициллин, изопропил-β-d-тиогалактопиранозид и 5-бром-4-хлор-3-индолил-β- d-галактопиранозид и инкубировали при 37 ° C в течение ночи.Отбирали от 5 до 10 трансформированных колоний и получали препараты плазмид с использованием набора плазмидной ДНК Qiagen.

5′-нуклеазный ПЦР-анализ. 5′-нуклеазный ПЦР-анализ и условия амплификации были оптимизированы в соответствии со стандартными протоколами, используемыми в нашей лаборатории, путем корректировки концентраций праймера, зонда и MgCl ₂ , а также температуры и продолжительности термоциклирования. . Реакции проводили в объемах 30 мкл для прибора Smart Cycler и 20 мкл для прибора LightCycler.Каждая реакционная смесь содержала буфер для ПЦР (50 мМ Трис [pH 8,3], 25 мкг бычьего сывороточного альбумина на мл), 0,2 мМ смесь дезоксинуклеозидтрифосфата, 0,4 мкМ каждого праймера, 5 мМ MgCl ₂ для прибора Smart Cycler или 7 мМ MgCl ₂ для прибора LightCycler, зонд TaqMan 170 нМ для прибора Smart Cycler или зонд TaqMan 75 нМ для прибора LightCycler, 1,35 ЕД ДНК-полимеразы Platinum Taq (Invitrogen, Карлсбад, Калифорния) для прибора Smart Cycler или 0.8 ед. ДНК-полимеразы Platinum Taq для прибора LightCycler и 5 мкл ДНК-матрицы. Термоциклирование для прибора Smart Cycler выполняли следующим образом: 1 цикл при 95 ° C в течение 2 минут, затем 45 циклов при 95 ° C в течение 10 с и 60 ° C в течение 45 секунд. Для прибора Smart Cycler сбор и анализ данных выполнялись с помощью программного обеспечения Cepheid Smart Cycler (версия 1.2d). Для прибора LightCycler термоциклирование выполняли следующим образом: 2 мин при 95 ° C, затем 45 циклов при 95 ° C в течение 1 с и 60 ° C в течение 20 с.Каждая капиллярная реакционная пробирка считывалась в канале 1 (F1) при настройке усиления 16, с считыванием флуоресценции в конце каждого шага 60 ° C. Для прибора LightCycler данные были проанализированы с помощью программного обеспечения LightCycler Data Analysis (версия 1.1), а результаты были проанализированы и интерпретированы до получения положительного или отрицательного результата. Все реакции, которые проводились во время тестирования закодированных образцов, включали по крайней мере один положительный контроль, который содержал 5 мкг (около 25 копий) очищенной геномной ДНК вируса натуральной оспы Бангладеш 1975 года и один безматричный контроль.Положительный контроль с 5 фг вирусной ДНК в каждом прогоне устанавливал значение порогового цикла ( C _t ) для положительности. Образцы, дающие значения C _t , которые незначительно превышали это пороговое значение, были помечены для повторного тестирования. Если было подтверждено, что значение C _t превышает пороговое значение после повторного тестирования, такой образец считался отрицательным (т.е. образец содержал <25 копий гена). Расчеты чувствительности и специфичности были определены следующим образом: процентная чувствительность = [TP / (TP + FN)] × 100 и процентная специфичность = [TN / (TN + FP)] × 100, где TP - количество истинно положительных образцов. , FN - количество ложноотрицательных образцов, TN - количество истинно отрицательных образцов, а FP - количество ложноположительных образцов.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Конструкции праймеров для ПЦР и зонда TaqMan, а также оптимизация реакций TaqMan и условий цикла были такими, как описано в протоколе Applied Biosystems 04304449. Плазмида J7R была сконструирована для облегчения начальной оценки и оптимизации анализа. . Клонированная вставка J7R была секвенирована стандартным секвенированием цикла терминатора красителя, и ее последовательность была на 100% гомологичной опубликованной последовательности вируса натуральной оспы Бангладеш 1975 (номер доступа GenBank.L22579 ) более 942 нуклеотидов (данные не показаны).

Предел обнаружения (LOD) анализа на приборе SmartCycler был определен из серийных разведений плазмидной ДНК J7R, а также геномной ДНК, очищенной от вирионов натуральной оспы. Анализ воспроизводимо детектировал 0,05 фг плазмидной ДНК и 5 фг геномной ДНК, что представляет приблизительно 12 и 25 копий генов гемагглютинина из плазмидной и геномной ДНК соответственно. Данные экспериментов по LOD плазмид и геномной ДНК показали линейную корреляцию с динамическим диапазоном 7 порядков величины, представляющим приблизительно от 25 до 25 000 000 копий.На рисунке 1 показан LOD анализа, а на рисунке 2 показан динамический диапазон, полученный с очищенной геномной ДНК вируса натуральной оспы. Аналогичные результаты были получены на приборе LightCycler (данные не показаны).

РИС. 1.

LOD анализа, выраженное в количестве копий. Десятикратные серийные разведения очищенной геномной ДНК вируса натуральной оспы (от 1 фг / мкл до 1 нг / мкл) были протестированы с зондом TaqMan VARJ7R3P на приборе Smart Cycler. Каждая кривая представляет собой среднее значение флуоресценции пяти различных прогонов. Поскольку для каждой концентрации в каждом цикле использовалось 5 мкл, количество копий представлено как 2.5 × 10 ¹ (2.5E + 01), 2,5 × 10 ² , 2,5 × 10 ³ , 2,5 × 10 ⁴ , 2,5 × 10 ⁵ , 2,5 × 10 ⁶ и 2,5 × 10 ⁷ .

РИС. 2.

Динамический диапазон анализа. Регрессионный анализ был проведен на C _t по количеству копий журнала. Всего 83 образца содержали очищенную геномную ДНК вируса натуральной оспы в концентрациях от 1 фг / мкл (25 копий) до 10 нг / мкл (25 × 10 ⁶ копий). Фактические и прогнозируемые значения показаны с коэффициентом линейности ( r ² = 0.95; значение F = 6,7E-56).

Анализ оценивали с помощью тестовой группы, которая включала 322 закодированных образца геномной ДНК из 48 различных изолятов вируса натуральной оспы; 25 различных штаммов и изолятов вирусов оспы верблюдов, коровьей оспы, эктромелии, песчанок, герпеса, оспы обезьян, миксомы, кроличьей оспы, оспы енотов, скунсов, оспы оспы и ветряной оспы; и два вида риккетсиозов (табл. 1). Концентрации ДНК, использованные в тестовой панели, варьировались от 100 фг / мкл до 1 нг / мкл и включали общую вирусную и клеточную ДНК из клеточных лизатов и материала корки, а также очищенные вирусные ДНК.В таблице 2 представлены сводные результаты слепого исследования, полученные с помощью прибора SmartCycler, и образцы ДНК, содержащие от 100 фг до 1 нг нуклеиновых кислот на мкл. Два образца (содержащие вирус коровьей оспы и Rickettsia conorii ) с ложноположительными результатами были обнаружены среди 116 образцов, не содержащих вирус натуральной оспы; то есть общая специфичность анализа с прибором SmartCycler составила 98,3%. Пять образцов (содержащие вирус коровьей оспы, оспы енотов и эктромелии Moscow) с ложноположительными результатами были обнаружены с помощью прибора LightCycler, что дало общую специфичность 95.8%. Из 206 образцов, которые содержали ДНК, экстрагированную из лизатов клеток вируса натуральной оспы или очищенного вируса натуральной оспы в концентрациях от 100 фг / мкл до 1 нг / мкл, 8 образцов считались отрицательными с помощью прибора Smart Cycler, а 1 образец считался отрицательным с помощью Прибор LightCycler. Таким образом, клиническая чувствительность составила 96,1% для инструмента SmartCycler и 99,5% для инструмента LightCycler при уровне детализации 25 копий.

ТАБЛИЦА 2.

Сводка результатов идентификации ДНК вируса натуральной оспы, выделенной из 48 изолятов с использованием зонда VARJ7R3P TaqMan на приборе Smart Cycler ^a

ОБСУЖДЕНИЕ

Вакцинация против оспы была прекращена в США и в другом месте почти два десятилетия назад, после того как болезнь была объявлена ​​искорененной в 1979 году.С тех пор численность населения мира значительно увеличилась, и теперь пропорционально большее число людей полностью или частично восприимчивы к инфекции вируса оспы. Тот факт, что оспа была искоренена, не исключает возможности ее рецидива как естественной или преднамеренной биологической угрозы. Хотя искоренение оспы считается одним из величайших достижений в истории медицины, в настоящее время это достижение делает вирус оспы одним из самых страшных видов оружия в сценариях биологической войны или биотерроризма.Сегодня, когда молекулярная микробиология и биотехнология постоянно усложняются, массовое производство вируса натуральной оспы или генно-инженерных аналогов для использования в качестве биологического оружия не является чем-то невероятным. Поэтому крайне важно разработать надежные диагностические тесты для раннего выявления и подтверждения подозрения на оспу в качестве первой линии защиты.

Описано несколько основанных на ПЦР методов идентификации ортопоксвирусов (14, 17, 20, 21, 22, 23).Эти методы основаны на анализе размеров продуктов ПЦР с помощью электрофореза в агарозном геле после расщепления рестрикционной эндонуклеазой. Хотя эти методы обеспечивали высокую степень специфичности и позволяли дифференцировать виды, а иногда и дифференциацию штаммов, они требовали трудоемкой и длительной обработки после ПЦР. Также были описаны новые подходы, которые используют видоспецифичную гибридизацию олигонуклеотидов на микрочипе (12) и зонды флуоресцентного резонансного переноса энергии на приборе LightCycler (4).Другой подход, 5′-нуклеазная ПЦР или анализ TaqMan, впервые разработанный Holland et al. (9) и улучшены Lee et al. (13), позволяет одновременную амплификацию и обнаружение нуклеиновых кислот в реальном времени; и когда анализ сочетается с портативными аналитическими платформами, такими как прибор Smart Cycler или прибор LightCycler, его можно легко развернуть в полевых условиях для использования для быстрого диагностического тестирования. Ранее мы сообщали о реализации анализа TaqMan и технологии флуорогенной ПЦР для идентификации ортопоксвируса, а также других агентов биологической угрозы (5, 6, 7, 8, 10, 11).

В этом исследовании предел обнаружения нашего анализа оценивался с использованием очищенной геномной ДНК вируса натуральной оспы и плазмидной ДНК J7R. Предел обнаружения плазмидной ДНК составил 0,05 фг, или примерно 12 копий гена. Для геномной ДНК вируса натуральной оспы предел обнаружения составлял 5 фг, или приблизительно 25 копий генома.

Когда анализ был оценен с 322 закодированными образцами, которые включали инфицированные вирусом натуральной оспы клетки и ткани, очищенную ДНК вируса натуральной оспы, а также ДНК 25 других видов и изолятов ортопоксвирусов, вируса простого герпеса, Rickettsia , вируса миксомы и вируса ветряной оспы-опоясывающего лишая, чувствительность анализа составила 96.1% с прибором Smart Cycler и 99,5% с прибором LightCycler. Специфичность составила 98,3% с прибором Smart Cycler и 95,7% с прибором LightCycler при уровне детализации 25 копий. Только 2 из 116 образцов, не содержащих вирус натуральной оспы, были ложноположительными с помощью прибора Smart Cycler, а 5 образцов были ложноположительными с помощью прибора LightCycler. Из двух образцов с ложноположительными результатами, полученными с помощью прибора Smart Cycler, один содержал вирус коровьей оспы, а другой – R.conorii . Образцы с ложноположительными результатами, полученными с помощью прибора LightCycler, содержали вирус коровьей оспы, оспы енотов или эктромелии. Другие образцы, включая образцы, содержащие вирус осповакцины, вирус простого герпеса типа 1 и вирус ветряной оспы, были первоначально признаны положительными с помощью программы LightCycler Detector (Idaho Technologies). Однако при дальнейшем просмотре графиков для образцов значения C _t для этих образцов были значительно выше, чем для положительного контроля.Когда эти образцы были протестированы повторно, они были явно отрицательными. Поэтому мы пришли к выводу, что эти образцы могли быть загрязнены во время тестирования. Ни один из этих образцов не должен вступать в перекрестную реакцию с зондом VARJ7R3P, поскольку последовательность зонда специфична для вируса натуральной оспы в используемых условиях, о чем свидетельствует отсутствие перекрестной реактивности с семью другими образцами, содержащими вирус коровьей оспы, семью образцами, содержащими Rickettsia , и образцы, содержащие другие вирусы эктромелии. Более того, зонд не вступил в перекрестную реакцию ни с одним из других 73 образцов, содержащих ортопоксвирусы, или 3 образцами, содержащими вирус миксомы, которые были протестированы вслепую, а также не вступил в перекрестную реакцию ни с одним из 13 образцов, содержащих вирус простого герпеса, или 8 образцов, содержащих вирус ветряной оспы. -zoster вирус, которые были включены.Кроме того, праймеры и зонд не вступали в перекрестную реакцию ни с одним из 78 образцов, содержащих ДНК 54 различных видов бактерий (данные не показаны). Следовательно, возможно, что ложноположительные реакции с этими образцами были вызваны загрязнением образца либо во время независимой подготовки тестовой панели, либо во время настройки анализа.

Следует отметить, что подавляющее большинство этих образцов было получено из культур клеток и тканей, инфицированных вирусом натуральной оспы; таким образом, ДНК-материал содержал как вирусную, так и клеточную ДНК.Из 43 закодированных образцов, которые содержали очищенную ДНК вируса натуральной оспы в диапазоне концентраций от 1 фг / мкл до 1 нг / мкл, анализы на обеих машинах правильно выявили вирусную ДНК во всех 43 образцах. Эти результаты показывают, что для свежеприготовленной очищенной геномной ДНК предел обнаружения анализа составляет 5 фг, или около 25 копий, и что вирусная ДНК в препаратах клеточного лизата и корок может составлять около 1% от общей ДНК в этих препаратах. .

В заключение, этот отчет впервые демонстрирует специфическую идентификацию вируса натуральной оспы в реальном времени, включая 48 различных изолятов вируса натуральной оспы, полученных из клинических образцов, а также из культур инфицированных вирусом клеток.Мы выбрали ген гемагглютинина в качестве мишени для специфической дифференцировки, поскольку он включен в концевую область генома, которая, как известно, более вариабельна, чем центральная область (2, 14, 18, 19, 22, 23). Другие концевые области в геноме, включая гомолог рецептора фактора некроза опухоли и белок включения A-типа, также могут быть использованы в качестве мишеней для видоспецифической идентификации (2). Поскольку анализ позволил правильно идентифицировать 48 различных изолятов вируса натуральной оспы, мы пришли к выводу, что последовательность, на основе которой был разработан зонд, сохраняется в изолятах вируса натуральной оспы.БЛАГОДАРНОСТИ поддерживать. Мы благодарим Мириам Лейкер, Даниэль Чекароу и Ричарда Кляйна за подготовку образцов ДНК вируса натуральной оспы и ортопоксвируса, использованных в этом исследовании. ДНК Rickettsia , вируса ветряной оспы и вируса герпеса были предоставлены Отделением вирусных зоонозов и риккетсий и отделами вирусов ветряной оспы и герпеса Отдела вирусных и риккетсиозных заболеваний Центров по контролю и профилактике заболеваний.

Взгляды и мнения, содержащиеся в этом отчете, принадлежат авторам и не должны рассматриваться как официальная позиция, политика или решение Министерства обороны США или Министерства здравоохранения и социальных служб США.

СНОСКИ

• Получено 27 ноября 2002 г.
• Возвращено для модификации 18 марта 2003 г.
• Принято 11 апреля 2003 г.

• Copyright © 2003 Американское общество микробиологии

ССЫЛКИ

5 906.№

Каваллеро, К. Ф. и Дж. Дж. Эспозито. 1992. Последовательности белка гемагглютинина поксвируса енота. Вирусология 190 : 434-449.

2.↵

Эспозито, Дж. И Ф. Феннер. 2002. Поксвирусы, с. 2885-2921. В Д. М. Книп, П. М. Хоули, Д. Э. Гриффин, Р. А. Лэмб, М. А. Мартин, Б. Ройзман и С. Е. Штраус (ред.), Вирусология Филдса, 4-е изд. Lippincott Williams & Wilkins, Филадельфия, Пенсильвания

3.№

Эспозито, Дж. Дж. И Дж. К. Найт. 1985. ДНК ортопоксвируса : сравнение рестрикционных профилей и карт. Вирусология 143 : 230-251.

4.↵

Эспи, М. Дж., Ф. Р. Кокерилл III, Р. Ф. Мейер, М. Д. Боуэн, Г. А. Поланд, Т. Л. Хэдфилд и Т. Ф. Смит. 2002. Обнаружение ДНК вируса оспы методом LightCycler PCR. J. Clin. Microbiol. 40 : 1985-1988.

5.↵

Хенчал, Э.А. и М. С. Ибрагим. 2000. Оценка методов полимеразной цепной реакции для идентификации биологических агентов, с. 239-249. В P. J. Stoppa и M. A. Bartoszcze (ред.), Экспресс-методы анализа биологических материалов в окружающей среде. Kluwer Academic Publishers, Дордрехт, Нидерланды.

6.

Хиггинс, Дж. А., Дж. У. Эззелл, Б. Дж. Хиннебуш, М. Шипли, Э. А. Хенчал и М. С. Ибрагим. 1998. 5′-нуклеазный анализ для обнаружения Yersinia pestis. J. Clin. Microbiol.6 : 2284-2288.

7.↵

Хиггинс, Дж. А., З. Хубалек, Дж. Халоузка, К. Л. Элкинс, А. Шостедт, М. Шипли и М. С. Ибрагим. 2000. Обнаружение Francisella tularensis у инфицированных млекопитающих и векторов с помощью полимеразной цепной реакции на основе зонда. Являюсь. J. Trop. Med. Hyg.62 : 310-318.

8.↵

Хиггинс, Дж. А., М. С. Ибрагим, Ф. К. Кнауэрт, Г. В. Людвиг, Т.M. Kijek, J. W. Ezzell, B.C. Courtney и E.A. Henchal. 2000. Чувствительная и быстрая идентификация агентов биологической угрозы. Анна. Акад. Sci. 894 : 130-148.

9.↵

Холланд, П. М., Р. Д. Абрамсон, Р. Уотсон и Д. Х. Гельфанд. 1991. Обнаружение продукта специфической полимеразной цепной реакции с использованием 5′-3′-экзонуклеазной активности ДНК-полимеразы Thermus aquaticus. Proc. Natl. Акад. Sci. USA88 : 7276-7280.

10.

Ибрагим, М. С., Дж. Дж. Эспозито, П. Б. Джарлинг и Р. С. Лофтс. 1997. Возможности 5′-нуклеазной ПЦР для обнаружения одноосновного полиморфизма в ортопоксвирусе . Мол. Клетка. Зонды11 : 143-147.

11.↵

Ибрагим, М. С., Р. С. Лофтс, П. Б. Ярлинг, Э. А. Хенчал, В. В. Видн, М. А. Нортруп и П. Белградер. 1998. ПЦР с микрочипом в реальном времени для обнаружения разницы в одном основании в вирусной ДНК и ДНК человека.Анальный. Chem.70 : 2013-2017.

12.↵

Лапа, С., М. Михеев, С. Щелкунов, В. Михайлович, А. Соболев, В. Блинов, И. Бабкин, А. Гуськов, А. Е. Сокунов, А. Заседателев, Л. Сандахчиев, А. Мирзабеков. 2002. Идентификация ортопоксвирусов на уровне видов с помощью олигонуклеотидного микрочипа. J. Clin. Microbiol. 40 : 753-757.

13.↵

Ли, Л. Г., К. Р. Коннелл и У. Блох. 1993 г.Аллельная дискриминация методом ник-трансляции ПЦР с флуорогенными зондами. Nucleic Acids Res.21 : 3761-3766.

14.

Лопарев В. Н., Р. Ф. Массунг, Дж. Дж. Эспозито и Х. Мейер. 2001. Обнаружение и дифференциация ортопоксвирусов Старого Света: полиморфизм длины рестрикционного фрагмента области гена crmB . J. Clin. Microbiol.39 : 94-100.

15.↵

Mackett, M., and L.C.Арчард. 1979. Сохранение и изменение структуры генома ортопоксвируса. J. Gen. Virol. 45, : , 683-701.

16.↵

Massung, R. F., L. I. Liu, J. Qi, J. C. Knight, T. E. Yuran, A. R. Kerlavage, J. M. Parsons, J. C. Venter и J. J. Esposito. 1994. Анализ полного генома штамма основного вируса натуральной оспы Бангладеш-1975. Вирусология 201 : 215-240.

17.↵

Мейер, Х., М. Пфеффер и Х. Дж. Рзиха. 1994. Изменения последовательностей внутри и ниже генов белка включения А-типа позволяют дифференцировать виды ортопоксвирусов с помощью полимеразной цепной реакции. J. Gen. Virol. 75, : , 1975–1981.

18.↵

Мейер, Х., С. Л. Ропп и Дж. Дж. Эспозито. 1997. Ген белка телец включения А-типа полезен для анализа полимеразной цепной реакции для дифференциации ортопоксвирусов. J. Virol. Методы64 : 217-221.

19.

Мейер, Х., С. Л. Ропп и Дж. Дж. Эспозито. 1998. Поксвирусы, стр. 199-211. В А. Варнес и Дж. Стивенсон (ред.), Методы в молекулярной медицине: диагностические протоколы вирусологии. Humana Press, Totowa, N.J.

20. ↵

Meyer, H., H. Neubauer, and M. Pfeffer. 2002. Амплификация последовательностей вируса оспы оспы , специфичных для изолятов немецкого вируса коровьей оспы. J. Vet. Med. Заразить. Дис.Вет. Общественное здравоохранение59 : 17-19.

21.↵

Нойбауэр, Х., М. Пфеффер и Х. Мейер. 1997. Специфическое обнаружение вируса оспы мышей методом полимеразной цепной реакции. Лаборатория. Anim.31 : 201-205.

22.

Neubauer, H., U. Reischl, S. Ropp, J. J. Esposito, H. Wolf и H. Meyer. 1998. Специфическое обнаружение вируса оспы обезьян с помощью полимеразной цепной реакции. J. Virol. Методы74 : 201-207.

23.↵

Ropp, S. L., Q. Jin, J. C. Knight, R. Massung и J. J. Esposito. 1995. Стратегия ПЦР для идентификации и дифференциации оспы и других ортопоксвирусов. J. Clin. Microbiol.33 : 2069-2076.

Клональный вирус осповакцины, выращенный в культуре клеток в качестве новой противооспенной вакцины

1

Henderson, D.A. и другие. Оспа как биологическое оружие: управление медициной и общественным здравоохранением. J. Am. Med. Доц. 281 , 2127–2137 (1999).

CAS Статья Google ученый

2

Феннер, Ф., Хендерсон, Д.А., Арита, И., Езек, З., Ладный, И.Д. Оспа и ее искоренение (Всемирная организация здравоохранения, Женева, 1988 г.).

Google ученый

3

Хендерсон Д.А. & Moss, B. в Vaccines (ред. Plotkin, S.A. и Orenstein, W.A.) 74–97 (Saunders, Philadelphia, 1999).

Google ученый

4

LeDuc, J.W. И Бехер, Дж. Текущее состояние противооспенной вакцины. Emerg. Заразить. Дис. 5 , 593–594 (1999).

CAS Статья Google ученый

5

Клетки Нагао, С., Инаба, С. и Иидзима, С. Лангерганса в местах инокуляции вируса осповакцины. Arch. Дерматол. Res. 256 , 23–31 (1976).

CAS Статья Google ученый

6

Cole, G. & Blanden, R. in Comprehensive Immunology Vol. 9 Иммунология инфекции человека Часть II Вирусы и паразиты (ред. Нахмиас, А.Дж. и О’Рейли, Р.Дж.) 1–19 (Пленум, Нью-Йорк, 1982).

Google ученый

7

Frey, S.E. и другие. Дозозависимые эффекты противооспенной вакцины. N. Engl. J. Med. 346 , 1275–1280 (2002).

CAS Статья Google ученый

8

Frey, S.E. и другие. Клинические реакции на неразбавленную и разбавленную противооспенную вакцину. N. Engl. J. Med. 346 , 1265–1274 (2002).

CAS Статья Google ученый

9

Маренникова С.С., Чимишкян К.Л., Мальцева Н.Н., Шелухина Е.М., Федоров В.В. in Proceedings of the Symposium on Smallpox, 2 & 3 сентября 1969 г. (ed. Gusic, B.) 65–79 (Югославская академия наук и искусств, Загреб, 1969).

Google ученый

10

Маренникова С.С. на Международном симпозиуме по противооспенной вакцине, Билтховен, Нидерланды, 11–13 октября 1972 г., Vol. 19 253–260 (Каргер, Базель, 1973).

11

Морита, М., Арита, М., Комацу, Т., Амано, Х. и Хашизуме, С. Сравнение нейровирулентности вируса осповакцины при интраталамической и / или внутрицистернальной инокуляции обезьянам cynomolgus. Microbiol. Иммунол. 21 , 417–418 (1977).

CAS Статья Google ученый

12

Williamson, J.D., Reith, R.W., Jeffrey, L.J., Arrand, J.R. & Mackett, M. Биологическая характеристика рекомбинантных вирусов осповакцины у мышей, инфицированных респираторным путем. J. Gen. Virol. 71 , 2761–2767 (1990).

Артикул Google ученый

13

Bray, M. et al. Цидофовир защищает мышей от летального аэрозоля или интраназального заражения вирусом коровьей оспы. J. Infect. Дис. 181 , 10–19 (2000).

CAS Статья Google ученый

14

Мартинес, М.Дж., Брей, М.П. И Хаггинс, Дж.W. Модель ортопоксвирусного заболевания, передаваемого аэрозолем, на мышах: морфология экспериментального ортопоксвирусного заболевания, передаваемого аэрозолем, в системе вирус коровьей оспы – мышь BALB / c. Arch. Патол. Лаборатория. Med. 124 , 362–377 (2000).

CAS PubMed Google ученый

15

Тонкие, полые келоиды, содержащие волосы и сальные железы. Arch. Дерматол. 96 , 185–187 (1967).

CAS Статья Google ученый

16

Центры по контролю за заболеваниями.Сердечные события после вакцинации против оспы – США, 2003 г. MMWR Morb. Смертный. Wkly. Отчет 52 , 248–250 (2003).

17

Кутинова Л. и др. Поиск оптимального родителя для рекомбинантных вакцин против вируса осповакцины. Изучение трех вакцинных штаммов вируса осповакцины и нескольких вирусных линий, полученных на их основе. Вакцина 13 , 487–493 (1995).

CAS Статья Google ученый

18

Кутинова, Л.и другие. Влияние родительского штамма вируса на вирулентность и иммуногенность рекомбинантных вирусов осповакцины, экспрессирующих белок preS2-S HBV или гликопротеин I VZV. Vaccine 14 , 1045–1052 (1996).

CAS Статья Google ученый

19

Ehrengut, W., Sarateanu, D.E., Alswede, U., Habib, A. & Tetzlaff, G. Варианты вируса осповакцины как предполагаемая причина вакцинных осложнений. Arch.Virol. 48 , 229–238 (1975).

CAS Статья Google ученый

20

Вилесова И.С., Гурвич Е.Б., Дзагуров С.Г., Григорьева Л.В. И Абель, Х. Изменения свойств вируса коровьей оспы, выделенного при поствакцинальном энцефалите. Вопр. Virusol. 30 , 477–482 (1985).

CAS PubMed Google ученый

21

МакИнтош, К.и другие. Клинические и серологические исследования четырех противооспенных вакцин, сравнивающие варианты дозы и пути введения. Стандартная чрескожная ревакцинация детей, получающих первичную чрескожную вакцинацию. J. Infect. Дис. 135 , 155–166 (1977).

CAS Статья Google ученый

22

Рид, Л. и Мюнч, Х. Простой метод определения пятидесятипроцентных конечных точек. амер. J. Hyg. 27 , 493–497 (1938).

Google ученый

23

Смит, Г.Л., Вандерплашен, А. и Ло, М. Формирование и функция внеклеточного оболочечного вируса осповакцины. J. Gen. Virol. 83 , 2915–2931 (2002).

CAS Статья Google ученый

24

Эннис, Ф.А., Круз, Дж., Демкович, У.Э., Ротман, А.Л. и Макклейн, Д.Дж. Первичная индукция цитотоксических Т-лимфоцитов человека CD8 ⁺ и Т-клеток, продуцирующих интерферон-γ, после вакцинации против оспы. J. Infect. Дис. 185 , 1657–1659 (2002).

Артикул Google ученый

25

Просс, Х.Ф., Бейнс, М.Г., Рубин, П., Шрагг, П., Паттерсон, М.С. Спонтанная цитотоксичность, опосредованная лимфоцитами человека, в отношении опухолевых клеток-мишеней. IX. Количественное определение активности естественных клеток-киллеров. J. Clin. Иммунол. 1 , 51–63 (1981).

CAS Статья Google ученый

ДНК, выделенная учеными из вакцины против оспы времен гражданской войны

В этих наборах для вакцинации остались кусочки парши и микроскопические мазки гноя на 150 человек… [+] лет.

Duggan et al. 2020 ДНК

, секвенированная из наборов для вакцинации против оспы 150-летней давности, проливает свет на эволюционную историю вирусных штаммов, используемых в противооспенных вакцинах.

В течение 1860-х и 1870-х годов несколько врачей из Филадельфии оставляли свои наборы для вакцинации в коллекции музея Мюттера – некоторые с кусочками корки, все еще прилипшими к внутренней части жестяных коробок, и микроскопическими остатками гноя на предметных стеклах. 150 лет спустя молекулярный антрополог Ана Дагган, древний генетик Дженнифер Кланк и их коллеги обнаружили в этом материале фрагменты как человеческой, так и вирусной ДНК.Последовательности ДНК из наборов для вакцинации дают представление о первых днях вакцинации, когда врачи использовали конскую и коровью оспы как взаимозаменяемые и собирали ингредиенты вакцины прямо из инфицированных пустул человека.

Вирус, который помог защитить людей в Филадельфии от оспы во время и после Гражданской войны, оказывается тесно связан с современным вирусом осповакцины: более легким родственником оспы.

На полках коллекции медицинских артефактов Музея Мюттера Дугган, Клунк и их коллеги нашли пять наборов для вакцинации против оспы, датируемых 1859–1873 годами.В то время врачи, которые хотели смешать дозу противооспенной вакцины, фактически собирали жидкость и кусочки парши у людей, инфицированных лошадиной или коровьей оспой. Наборы, которые они несли для работы, включали стеклянные пластины для смешивания лимфатической жидкости из гнойничков, жестяные коробки для хранения кусочков струпа и ланцеты для нанесения инфицированного месива на царапину или порез на коже пациента.

Дагган, Кланк и их коллеги секвенировали ДНК по следам 150-летней корочки в жестяных коробках, а также микроскопических остатков, оставшихся на стеклянных пластинах и внутри коробок (стерилизация еще не имела большого значения. 1860-е годы).Они сравнили фрагменты вирусной ДНК с геномами современных представителей рода Orthopox, включая оспу, коровью оспу, коровью оспу и оспу. Статистические модели отсортировали вирусную ДНК из 19 вакцин ^{-го века} в ту же группу, что и вирус осповакцины.

Vaccinia, вероятно, является случайным гибридом вирусов коровьей оспы и лошадиной оспы, которые использовались в качестве противооспенных вакцин в 1800-х и начале 1900-х годов, но мы не можем проследить его генеалогическое древо более подробно, чем это.

Странное генеалогическое древо штаммов противооспенной вакцины

Как Эдвард Дженнер выяснил в 1796 году, большинство вирусов ортопедии настолько генетически схожи, что заражение одним из них может способствовать развитию иммунитета против других (пожалуйста, не пытайтесь делать это дома).Дженнер начал с оспы, но позже начали лечить и другие. До начала 20 века не существовало стандартизации в производстве вакцин, и в большинстве случаев было очень мало сведений о том, откуда взялся материал, использованный для изготовления вакцины, не говоря уже о том, что он на самом деле содержал.

Группа вирусологов открыла вакцину в 1939 году, когда проверила содержимое яиц, которые в то время использовались для производства вакцин. Вероятно, ожидается обнаружение штамма либо коровьей, либо конской оспы.Вместо этого они обнаружили совершенно новый вирус – вирус, который развился в лаборатории по производству вакцин, а не на животных-хозяевах в дикой природе.

В качестве примечания, термины «коровья оспа» и «конская оспа» могут технически использоваться неправильно. Хотя люди впервые обнаружили вирусы у коров и лошадей, соответственно, Дагган, Клунк и их коллеги отмечают, что «ни коровы, ни лошади не считаются естественными резервуарами этих вирусов». Каковы их естественные резервуары? Над этим вопросом до сих пор работают вирусологи и экологи.

Между тем, вирус ортопоксии под названием Cantalogo, поражающий молочных коров в Бразилии, может быть бывшим штаммом вакцины, который случайно попал в дикую природу где-то в 1800-х годах. Дугган, Клунк и их коллеги предполагают, что штамм «лошадиной оспы», обнаруженный в Монголии в 1976 году, также может быть ускользнувшим штаммом осповакцины, поскольку статистические модели также сортируют его по той же линии, что и вирус осповакцины.

«Вакцинация была исключительно человеческим процессом»

Штаммы вируса во всех 5 наборах для вакцинации были очень близки, и они также были очень близки к коммерчески производимому образцу вакцины 1902 года.Образец вакцины 1902 года также был произведен в Филадельфии, как и все 5 наборов из музея Мюттера 1860-1870-х годов. Дагган, Клунк и их коллеги говорят, что это может быть намеком на то, что к 1860-м годам в Филадельфии было не так много штаммов вируса ортопоксии, и врачи и фармацевтические компании, возможно, уже получали ингредиенты вакцины из общего источника.

В конце 1800-х годов «общий источник» означал штамм вируса, обнаруженный у инфицированных людей.

«Вакцинация была исключительно человеческим процессом», – писали Дагган, Клунк и их коллеги. «Материал для вакцинации все еще производился на людях и передавался напрямую от доноров к пациентам». Ситуация изменилась в начале 20-го, ^-го, -го века, когда потребители и регулирующие органы начали понимать, что есть некоторые проблемы со здоровьем и безопасностью, связанные с передачей инфицированного гноя от одного человека напрямую другому. Примерно в то же время фармацевтические компании начали понимать, что массовое производство вирусных штаммов для вакцин для животных более рентабельно.Сегодня штаммы вируса коровьей оспы, используемые для противооспенных вакцин, производятся в различных культурах клеток.

На большей части американского Юга чернокожие дети часто заражались коровьей или конской оспой, так что врачи или производители вакцин могли собирать гной и струпья для изготовления вакцин. Эта практика возникла примерно через столетие после того, как бостонский министр Коттон Мэзер (да, тот же Коттон Мэзер из Салемских процессов над ведьмами) взял идею вакцинации против оспы от порабощенного африканца из своего дома, Онисима.И это явно расистское повторение той же социально-экономической иерархии, которая побудила Эдварда Дженнера испытать первую противооспенную вакцину на сыне своего садовника.

История болезни изобилует вещами, которые заставляют вас злиться, просто читая о них.

У нас нет возможности узнать, кто поставлял материал для вакцинации врачам в Филадельфии 1860-х годов, но человеческая ДНК из наборов для вакцинации предполагает, что струпья и гной были получены от людей европейского происхождения, а две трети образцов были женскими.Разумно предположить, что эти люди, вероятно, не были финансово обеспеченными или социально связанными, но даже имея в руках обрывки своей ДНК, они остаются анонимными.

Дагган, Кланк и их коллеги опубликовали свои результаты в журнале Genome Biology .

Историческая экспедиция иммунизации

, запущенная из Испании 200 лет назад, открыла новый мир вакцинам

Сиро де Квадрос Сабина представляет Новый Ханаанский институт в Испании

ГАЛИСИЯ, ИСПАНИЯ – Институт вакцин Сабина был представлен на международном мероприятии в Ла-Колунье, Испания в ознаменование 200-летия отбытия экспедиции Бальмис-Сальвани.Чиро де Квадрос, доктор медицины, магистр здравоохранения, директор международных программ Института, был рядом, чтобы представить техническую презентацию и стать свидетелем открытия скульптуры в натуральную величину, изображающей детей, которые сыграли важную роль в испанской экспедиции по доставке вакцины против оспы из королевство в колонии в Америке и Азии.

До того, как была открыта противооспенная вакцина, болезнь убивала людей всех возрастов и всех социально-экономических слоев. В конце 18 века 400 000 европейцев умерли, а треть выживших ослепла в результате болезни.Эдвард Дженнер сообщил о своих экспериментах с вакциной в 1798 году, и мир сразу же захотел этого.

Как и в Европе, в испанских колониях наблюдалась серьезная смертность и заболеваемость оспой, и к концу 18 века Испания прогнозировала серьезные экономические потери в результате сокращения рабочей силы в колониях. В 1803 году король Испании Карл IV, который потерял одного из своих детей из-за оспы, издал королевский приказ предоставить вакцину и спонсировал экспедицию.

Экспедиция Балмис-Сальвани, названная в честь врачей, которые ее возглавляли, была первой официальной программой массовой вакцинации в испанской Америке и во всем мире. Экспедиция вышла из испанской гавани Ла-Корунья 30 ноября 1803 года. В груз корабля входила сыворотка вакцины, хранившаяся между запечатанными стеклянными пластинами; на борту также находился 21 ребенок из приюта в Ла-Корунья, которые пронесли вакцину с помощью прививок, проводимых последовательно во время путешествия корабля.

Экспедиция Бальмис-Сальвани важна не только из-за вакцины, но и потому, что она учредила комиссии по вакцинации, которые будут вести учет проведенных вакцинаций и сохранять сыворотку для будущих вакцинаций.После этой экспедиции совместными усилиями всего мира удалось успешно вакцинировать население до такой степени, что в 1980 году Всемирная организация здравоохранения смогла заявить, что оспа искоренена.

Доктору де Квадросу, участвовавшему в усилиях по искоренению оспы, была подарена уменьшенная копия 10-футовой памятной скульптуры, посвященной 29 ноября, на причале в Ла-Корунья, откуда экспедиция отправилась 200 лет назад.